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酵母醇脱氢酶实验报告
生化实验报告册 题目：酵母醇脱氢酶的相关研究 时间：2015 年3 月-2015 年6 月 成员：张博伦 131140046 强泽平 1311400 南京大学生命科学学院2013 级 南京大学生科院 13 级 酵母醇脱氢酶的相关研究 2015 年3 月-6 月 目录 序言部分 P3 一.酵母醇脱氢酶的提纯与测定 P4-8 二.酵母醇脱氢酶的凝胶层析 P9-11 三.酵母醇脱氢酶的专一性 P12-15 四.酵母醇脱氢酶的动力学 P16-25 五.酵母醇脱氢酶的电泳检验 P26-29 总结与反思 P30 2 南京大学生科院 13 级 酵母醇脱氢酶的相关研究 2015 年3 月-6 月 序言部分 醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase， ADH)是生物体内重要的氧 化还原催化剂之一，在生物催化、生物医学领域都有较为广泛的应 用。生物体内的很多醇类代谢物都是通过醇脱氢酶催化完成的。醇 脱氢酶来源广泛，种类繁多，可按肽链长度分为短链、中链、长链 醇脱氢酶，所含肽链氨基酸残基数分别为250、375 和600-750，酵 母醇脱氢酶(yeast alcohol dehydrogenase，YADH)是其中和应用最 为广泛的一种。酵母醇脱氢酶以NAD+/NADH 为辅酶，可逆催化醇和 醛/酮之间的氧化还原反应。酵母醇脱氢酶为四聚体，单个亚基肽链 含有347 个氨基酸残基，亚基相对分子质量为35000。 本学期实验以酵母醇脱氢酶为研究对象，分别进行对其分离与 提纯、凝胶层析、专一性、动力学、电泳检验其相对分子质量等几 个方面的研究。培养合作意识与操作能力、分析能力，提高我们的 综合实验技巧与完成学期报告的水平。 3 南京大学生科院 13 级 酵母醇脱氢酶的相关研究 2015 年3 月-6 月 实验一：酵母醇脱氢酶的提纯与测定 一、目的 1.学习和掌握醇脱氢酶提纯的原理和方法 2.进行酵母醇脱氢酶的浓度、活力测定 二、原理 以酵母为原料，利用热变性、有机溶剂沉淀蛋白质等方法，提取具有一定纯 度的酵母醇脱氢酶。在提纯过程中每经一步提纯处理，都需要测定酶蛋白质含量 和活力，并计算得比活力( 比活力=活力单位数\mg 蛋白质)。惟有比活力提高了， 才证明所用提纯措施有效，酶制剂的纯度提高了。 醇脱氢酶的辅酶NAD 它能催化乙醇脱氢变为乙醛，脱下的氢则使NAD+还原. 当有过量醇存在时，NAD+被还原的速度与酶活成正比，酶活力越高，单位时间产 生的 NADH 越多.NADH 对 340nm 紫外线有较强的吸收. NAD+无此能力.因此可用 测定A340 的方法测得反应体系中NADH 含量，从而得知酶活力的大小。 本实验采用Folin 酚法测定蛋白质浓度。 三、实验器材 1.干酵母粉：将鲜酵母分散成小块，放在搪瓷盘吹干。干燥后，研磨成粉末(80 目)。 2.烧杯250m1( ×1)，150m1
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