L—羟脯氨酸手性键合固定相的表征和色谱性能.pdfVIP

第24卷 分析化学 ‘FENXIHUAXUE) 研究简报 第6期 1996年 6月 ／ Chinese Journal of Analytical Chemistry 709～712 三一羟脯氨酸手性键合固定相的表征和色谱性能 l／ ·‘ _ 黄天宝‘ 陈 涛 龙远德 、 ■ (中国丽 晴 甄 所舳 610041) 摘 要 制备了 一羟脯氨酸手性键合固定相，井采用红外光谱、低温氮吸附和元素分析方法 表征了该键合相，系统考察了流动相pH，离子强度及柱温等色谱条件对 氨基酸对映体拆分 的影响．探讨了拆分色．谱过程热力学和拆分机理，拆分了14种 氨基酸对政体 关键词 配体交换色谱法，对映体分离， 氢基酸，手性固定相 l 弓I 言 在一氨基酸对映体的色谱拆分方法中，高效配体交换色谱法具有样品勿需衍生，对映体 选择性高，且色谱柱再生容易等优点，是最佳的色谱拆分方法之一“ 。本工作改善了合成条 件，制备了高键台量的L一羟脯氨酸手性键合固定相(L--Hypro—CSP)；用多种分析方法表征了 该键合组；考察了各种色谱条件对 ～氨基酸对映体拆分的影响；探讨了拆分色谱过程热力学 和拆分机理；拆分了14种 一氨基酸对映体。 2 实验部分 2．1 试剂 YwG一8O(10 n )微粒硅胶由青岛海洋化工厂生产，3缩水甘油氧丙基三甲氧基硅烷为 Pluka产品，邻 氯苯雨氨酸(。一cl—Phe)、邻一和问一硝基苯雨氨酸(o一和m NO Phe)由实验室合 成，中国科学院成都生物研究所提供，L一羟脯氨酸为天津市东方卫生材料厂生产．其它 氯基 酸样品为生化纯，产于上海生化试剂厂。其它试剂均为分析纯．水经二次重蒸馏。 2．2 L—Hypro—CSP带0备 将1．2 g(8．8 mmo1)L～羟脯氨酸钠盐溶于25 mL甲醇．加入l_8 mL(8．1 mmo1)3I身 水甘 油氧丙基三甲氧基硅烷，搅拌回流8 h，蒸除甲醇后，加入如mL甲苯和3．2 g预处理硅脏，在 6o℃下搅拌8 h，过滤，洗涤和真空干燥后得L—Hypro—CSP。 2．3 L—Hypro CSP的表征 在Micromeritics Degisorb 2600气体吸附仪上完成L—Hypro—CSP和YWG一8o硅胶的孔 结构测定。在Nicolet MX一1E红外分光光度计上，溴化钾压片法得到L Hypro CSP和YWG 8o硅胶的红外光谱图。用Carlo Erba 1106元素分析仪测定C、H、N元素的含量。 2．4 色谱测定 用cHEMc0 CPP 085装柱机在300×3．9 mm I．D不锈钢柱中填装L Hypro CSP．色谱 柱用前经10 mmoI／L的CuAc。水溶液饱和。在由Waters M6000泵、U6K进样阀、M440紧外 检测器(254 rim)和台式记录仪组成的系统上和不同的邑谱条件下完成色谱测定。 1995—07—12收稿，1995—1 1-2 7接受 71O 分 析 化 学 第 24卷 3 结果与讨论 3．1 L-Hypro—CSP的比表面、孔容和孔径分布 吸附法测得L—Hypro—CSP和YWG一80硅胶的比表面积分别为 1 54．6和 334．1 m ／g，孔 容分别为0．40和0．82 mL／g，键合相的孔分布曲线偏向JJ,~L。 3．2 红外吸收光谱 在键合相光谱图中，940 CE 处的sj—OH吸收峰明显减弱，而在1 450、2850和2925 CE 处出现了一CH 的特征吸收峰。表明硅胶表面上大部分硅羟基与硅烷形成了sj—O s；共价 键 3，3 L-Hypro—CSP的手性配体表面浓度 键合相的元素分析测定结果为：c 10．97；H 2，04；N 1．11(Ⅳ ) 按碳含量计算，每克工 Hypro—CSP键合相含有机物0，83 mmo[，其手性配体表面浓度为5，38~mol／m 。按