第三章 生物学研究方法.pdf

一、离心技术 • 是分离细胞器及各种大分子基本手段。 第二章 细胞组分的分析方法 • 转速为10~25kr/min的离心机称为高速离心 机。 • 转速25kr/min ，离心力89K ｇ者称为超速 离心机。 • 超速离心机的最高转速可达100000r/min， 离心力超过500Kg 。 （一）差速离心Differential centrifugation Differential centrifugation High speed • 特点： – 介质密度均一； – 速度由低向高，逐级离心。 • 用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。 • 沉降顺序：核—— 线粒体—— 溶酶体与过氧化物酶 体—— 内质网与高基体——核蛋白体。 • 可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再 Low speed 行分离纯化。 1 （二）密度梯度离心 • 用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细 胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力场的作用使 细胞和细胞成分分层、分离。 • 类型：速度沉降、等密度沉降。 • 常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。 • 分离活细胞的介质要求： – 1 ）能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高； – 2 ）PH 中性或易调为中性； – 3 ）浓度大时渗透压不大； – 4 ）对细胞无毒。 1、速度沉降velocity sedimentation 2.等密度沉降isopycnic sedimentation • 用途：分离密度相近而大小不等的细胞或细胞 • 用途：分离密度不等的颗粒。 • 特点： 器。 – 介质密度高，陡度大，介质最高密度大于被分离组分的最大密 •