第四版第十一章 吸光光度法.ppt

双波长吸光光度法的应用 * 混浊试液中组分测定 ：一般选择待测组分的最大吸收波长为测量波长(λl)，选择与其相近而两波长相差在40~60 nm范围内且有较大的ΔA值的波长为参比波长。 * 单组分的测定 ：进行单组分的测定，以络合物吸收峰作测量波长，参比波长的选择有：以等吸收点为参比波长; 以有色络合物吸收曲线下端的某一波长作为参比波长；以显色剂的吸收峰为参比波长。 * 两组分共存时的分别测定：当两种组分的吸收光谱有重叠时，要测定其中一个组分就必须消除另一组分的光吸收。对于相互干扰的双组分体系，它们的吸收光谱重叠，选择参比波长和测定波长的条件是:待测组分在两波长处的吸光度之差ΔA要足够大，干扰组分在两波长处的吸光度应相等，这样用双波长法测得的吸光度差只与待测组分的浓度成线性关系，与干扰组分无关，从而消除了干扰。 测定苯酚(X)与2，4，6-三氯苯酚(Y)混合物中的苯酚时就可用这种方法。当选择λ2为测量波长，三氯苯酚在此波长处也有较大吸收，产生干扰。选择波长λ1或λ1‘（等吸收点）作为参比波长，则可以消除三氯苯酚对苯酚测定的干扰。 （2）示差吸光光度法的误差 Δc(即cx－cs)，测量误差为x%， 结果为cx±(cx-cs)×x%； 普通光度法的结果为cx±cx·x%。因cx只是稍大于cs，故cx总是远大于Δc，故示差吸光光度法的准确度高。参比溶液的浓度越接近待测试液的浓度，测量误差越小，最小误差可达0.3%。 续前 （三）多组分的定量方法（解联立方程法） 三种情况： 1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量 续前 2．两组分吸收光谱部分重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Ca 续前 3．两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定 （1）解线性方程组法 （2）等吸收双波长消去法 （3）系数倍率法 1．解线性方程组法 步骤： （11-11） 2．等吸收双波长法 步骤： 消除a的影响测b 续前 消去b的影响测a 注：须满足两个基本条件 选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点 选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大 3．系数倍率法 前提：干扰组分b不成峰形 无等吸收点 续前 步骤：b曲线上任找一点→λ1 另一点→λ2 优点：同时将待测组分和干扰组分放大信号K倍， 提高了待测组分测定灵敏度 a b λ1 λ2 续前 二、双波长分光光度计 特点： 利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不匹配引起的误差 双波长吸光光度法的原理 * 混浊试液中组分测定 ：一般选择待测组分的最大吸收波长为测量波长(λl)，选择与其相近而两波长相差在40~60 nm范围内且有较大的ΔA值的波长为参比波长。 双波长吸光光度法的应用 * 单组分的测定 ：进行单组分的测定，以络合物吸收峰作测量波长，参比波长的选择有：以等吸收点为参比波长; 以有色络合物吸收曲线下端的某一波长作为参比波长；以显色剂的吸收峰为参比波长。 * 两组分共存时的分别测定：当两种组分的吸收光谱有重叠时，要测定其中一个组分就必须消除另一组分的光吸收。对于相互干扰的双组分体系，它们的吸收光谱重叠，选择参比波长和测定波长的条件是:待测组分在两波长处的吸光度之差ΔA要足够大，干扰组分在两波长处的吸光度应相等，这样用双波长法测得的吸光度差只与待测组分的浓度成线性关系，与干扰组分无关，从而消除了干扰。 测定苯酚(X)与2，4，6-三氯苯酚(Y)混合物中的苯酚时就可用这种方法。当选择λ2为测量波长，三氯苯酚在此波长处也有较大吸收，产生干扰。选择波长λ1或λ1‘（等吸收点）作为参比波长，则可以消除三氯苯酚对苯酚测定的干扰。 第六节 吸光光度法的应用 一、定性分析 二、定量分析 三、络合物组成 和酸碱常数测定 定性鉴别 纯度检查和杂质限量测定 单组分的定量方法 多组分的定量方法 络合物组成的测定 酸碱解离常数的测定 一、定性分析 （一）定性鉴别 定性鉴别的依据→吸收光谱的特征 吸收光谱的形状 吸收峰的数目 吸收峰的位置（波长） 吸收峰的强度 相应的吸光系数 续前 （二）纯度检查和杂质限量测定 1．纯度检查（杂质检查） 1）峰位不重叠： 找λ→使主成分无吸收，杂质有吸收→直接考察杂质含量 2）峰位重叠： 主成分强吸收，杂质无吸收 / 弱吸收→与纯品比较，E↓ 杂质强吸收 主成分吸收→与纯品比较，E↑，光谱变形 续前 2．杂质限量的测定： 例：肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算