Cyclin D1在口腔癌中表达及肿瘤生长率及预后关系.docVIP

Cyclin D1在口腔癌中表达及肿瘤生长率及预后关系 　 作者：李立 刘义 吴科锋 吕应年 【摘要】 目的 调查Cyclin D1表达与口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)肿瘤生长率及临床预后之间的关系。方法 来源于外科手术的诊断用组织切片接受了Cyclin D1蛋白免疫组化染色，并实施Ki67染色用以定量癌组织肿瘤生长率。结果 Cyclin D1表达于24例新辅助化疗组病例中的22例(91.7%)及24例单纯外科手术组病例中的23例(95.8%)。染色密度既与淋巴结转移无关，也与Ki67表达无关。KaplanMeier分析显示在Cyclin D1表达与新辅助化疗病例及单纯外科手术病例的总生存率之间存在密切关系(P＜0.05,P＜0.001)。结论 Cyclin D1在OSCC中具有预后意义。 【关键词】 PICC； 肠癌化疗 头颈部鳞癌最重要的预后判断因素为TNM分期，而淋巴结转移最为关键〔1〕。可是，由于肿瘤的生物学特性经常变化从而导致了尽管分期相同但临床疾病过程趋异。因此，近年来鉴别与临床进展相关的分子及生物预后因子的研究已被广泛开展。Cyclin D1作为调控细胞周期的分子标志物，常在头颈部鳞癌中过表达，提示该基因异常可能在口腔癌的发生发展过程中扮演了一个重要角色并可能充当独立的预后指标。在本研究中，检测了48例OSCC内的Cyclin D1免疫表达情况，除了分析其与Ki67标记指数所代表的肿瘤生长率之间是否具有相关性外，重点评价了Cyclin D1蛋白表达水平对OSCC患者预后生存的影响。 　　1 资料与方法 　　1.1 资料 　　标本来自作者所在大学附属医院1991年12月～2002年5月手术切除经病理证实的OSCC病例。根据术前治疗方法不同，将病例分为两组：①新辅助化疗组24例，男性16例、女性8例，年龄(平均64.5±13)岁，原发灶于舌15例、上龈1例、下龈4例、口底3例、颊黏膜1例，局部淋巴结转移15例，术前化疗药物为cisplatinum(CDDP)或5FU。化疗结束4～6 w后，病例均行外科切除手术。②单纯外科手术组病例24例，男性15例、女性9例，年龄(平均65.7±8.2)岁，原发灶于舌7例、上龈3例、下龈8例、口底3例、颊黏膜3例，局部淋巴结转移10例，该组病例除接受外科摘除手术治疗外未接受任何其他治疗。患者术后均跟踪随访。在本研究中，手术切除病理组织标本经10%福尔马林固定，制成石蜡包埋4 μm厚切片。 　　1.2 试剂 　　鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体购自德国IBL公司，鼠抗人Ki67单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，二抗为抗鼠抗体及ABC试剂盒购自丹麦DAKO公司。 　　1.3 免疫组化 　　切片脱蜡后浸于0.01 mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)内，微波炉加热至沸腾，并保持该状态15 min修复抗原；切片冷却后，浸于含0.3%H2O2的甲醇中灭活内源性过氧化物酶；PBS洗涤，2.5％脱脂乳封闭后不洗，滴加鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体(1∶500)，4℃过夜；PBS洗涤，加生物素标记二抗(1∶100)，室温下反应2 h； PBS洗涤，滴加ABC试剂，室温下反应50 min；PBS洗涤，DAB显色，苏木精轻染，二甲苯透明，封片。Cyclin D1染色后，另取切片以同样方法对Ki67蛋白进行染色，Ki67抗体稀释倍数为1∶100。 　　1.4 结果判定 　　在200倍镜下，每张切片选4处不同视野，辨别阳性细胞与阴性细胞。Cyclin D1表达阳性的细胞占肿瘤细胞总数的百分比定义为Cyclin D1标记指数(labeling index，LI)，同样Ki67表达阳性的细胞占肿瘤细胞总数的百分比定义为Ki67 LI。 　　1.5 统计学处理 　　采用SPSS 12.0软件系统的成组t检验、Pearson相关分析、 χ2检验及KaplanMeier法Log Rank检验。 　　2 结果 　　2.1 Cyclin D1在OSCC手术切除癌组织内的表达 　　在癌组织，Cyclin D1表达阳性的细胞核被染成棕黄色(图1)。24例新辅助化疗者中有22例Cyclin D1表达阳性，阳性表达率为91.7%，平均Cyclin D1 LI为10.3%±10.6%；24例单纯外科手术病例中有23例Cyclin D1表达阳性，阳性表达率为95.8%，平均Cyclin D1 LI为10.5%±10.6%。在两种治疗方法间，Cyclin D1表达无显著差异(P＞0.05)。 　　　2.2 Ki67在OSCC手术切除癌组织内的表达 　　在癌组织，Ki67表达阳性的细胞核为棕黄色(图1)。48例OSCC内均有Ki67表达