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HC2 HPV检测的临床意义 南京金域医学检测中心 尹芳 联系方式 谢谢! HPV检测 细胞学 HPV导致宿主细胞异常生长，形态学改变 HPV感染的诊断标准： 挖空细胞（核周空穴细胞） 角化不良 湿疣外底层细胞 HPV感染所致的病变越重 涂片中挖空细胞出现机会越少 HPV感染病变越轻 涂片中挖空细胞出现机会越多 低危型感染 涂片中挖空细胞出现机会多 HPV检测 聚合酶链反应 （Polymerase Chain Reaction ,PCR） 基于核酸杂交原理 在试管中进行DNA的反复复制 设计与HPV DNA互补的一对特异性核苷酸引物 以HPV DNA为模板 以指数增长的速率进行体外扩增 在几个小时内将DNA扩增109倍 提高诊断的敏感性。 是检测微量DNA的最敏感有效的方法 HPV检测 聚合酶链反应(PCR) 优点：敏感性最高，测定病毒载量， 对基因进行序列分析 缺点：假阳性 样品间易交叉污染， 假阴性 引物结合部位的基因突变 因引物、反应体系、产物检测方法不同， 敏感性和特异性随之变化， 缺乏一致的诊断标准 HC2 HPV DNA检测 二代杂交捕获 HCII （核酸杂交检测） 原理：在分子水平采用基因杂交-化学发光-信号放大的检测技术 高危型：混合探针(鸡尾酒探针) 13种：16、 18、 31、 33、 35、 39、 45 51、 52、 56、 58、 59、 68型 低危型： 5种：6、 11、 42、 43、44型 目前世界最先进病毒DNA检测技术,唯一获美国FDA认证可用于临床的HPV DNA检测技术,已获欧洲CE中国SDA认证 基因杂交信号扩大仪(二代杂交捕获技术 HCII) 取材 宫颈刷 采样器 应用 同一方向旋转三圈，停留十秒。 计算机 判读 15 min后 DNA-RNA 杂交 60 min 抗体 捕获 60 min 化学发光检测 30 min DNA 分解 45 min HC-II 基本原理与实验步骤图示 原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测 二代杂交捕获 HCII 效率高：96微孔板，一盒试剂可检测90人份,并可合理分批使用, 灵活适于大量人群及小量人群 操作简便、快速、重复性好、标准化 实验室及人员要求不高,便于开展 以基因全长(8000bps)为探针 无需基因扩增 结果客观准确 阴性预测值99.9% 敏感度98%， CINII、III、癌检出率99%以上 有统一的临床判定标准（≥1.0pg/ml为阳性） 如何选择HPV检测方法？ 特异性——阳性预测值 敏感度 分析水平敏感度——检测病毒DNA最低含量敏感度 临床病变敏感度——检测高度病变的敏感度 重复性 是否经过临床验证 HPV病毒含量与临床病毒的关系 1.0pg/ml：5000copies HPV检测分析水平与临床病变的关系 HPV分型与临床的关系 对宫颈病变的治疗、追踪、管理不因高危型HPV型别的改变而改变。 高危型HPV的致病性不因HPV型别而有明显差异，反而与病人自身免疫力有密切的关系。 目前没有任何与HPV型别有关的临床指引。 HPV检测能否给予临床帮助 —————一切取决于您的选择 只有选择经过临床验证，并得到国际和国内医疗管理机构认可的检测方法才对临床有帮助，并得到法律的保障。 HPV检测临床应用需明确的要点： 告诉HPV阳性的妇女，她只是感染了HPV，这不是疾病，CIN才是疾病。 对于只有HPV阳性，没有CIN的妇女，不需给予治疗。 HPV检测临床应用需明确的要点： 虽然性生活是HPV传播的主要途径，但目前证实口腔粘膜、皮肤等部位均有HPV病毒存在，所以不能排除其它途径的传播。 HPV阳性并不说明她，或她的性伴侣有什么不忠行为。 * 主要内容 宫颈癌的流行概况 宫颈癌病因学的突破性进展 HPV检测的临床意义 HPV检测方法的比较和选择 HPV检测在临床应用中应注意的问题 宫 颈 癌 全球女性恶性肿瘤的第二位 发展中国家恶性肿瘤的第一位 生殖道恶性肿瘤的首位 全世界每年新发病例数约46万多 发展中国家占80%，我国占1/3，15万 宫