水中大肠菌之检测-崑山电子历程-崑山科技大学.DOCVIP

濾膜法 目的 將水樣經由抽器幫浦真空抽氣，使其通過孔徑0.45±0.02um、直徑47mm之無菌濾膜，大腸菌類因無法通過而留至於濾膜上。將已過濾的濾膜至於吸滿乳糖培養液或Laury1 tryptose培養液之飽和吸收墊上，在攝氏35±0.5度Ｃ橫溫下培養1.5~2小時，接著取出濾膜移至M-Endo agar培養基或M-Endo培養液之飽和吸收墊上，攝氏35±0.5度C恆溫下培養22~24小時。培養過程中，大腸菌類會分解乳糖，產生氣體和醛類，醛類會與培養基(液)中的鹼性洋紅染料結合，在光線反射之下，呈現綠色金屬光澤的菌落，來計算大腸菌類的數目 原理 與冗長的多管發酵法實驗過程相較，以濾膜法測定大腸菌類顯得簡單許多。主要原理是將水樣經由抽氣幫浦真空抽氣，使其通過孔徑0.45±0.02μm、直徑維47mm之無菌濾膜，大腸菌類因無法濾過而留置於濾膜上。接著將已過濾的濾膜置於吸滿乳糖培養液或Laury1 tryptose 培養液之飽和吸收墊上，在攝氏35±0.5℃恆溫下培養1.5~2小時，接著取出濾膜移至M-Endo agar 培養基或M-Endo 培養液之飽和吸收墊上，攝氏35±0.5℃恆溫下培養22～24小時。培養過程中，大腸菌類會分解乳糖，產生氣體和醛類，醛類會與培養基（液）中的鹼性洋紅染料結合，在光線反射之下，呈現綠色金屬光澤的菌落，據此計算大腸菌類的數目。 通常濾膜上總菌數在200個以下，且大腸菌數20~30個時最適宜計算，若總菌數超過200個時，可將水樣進行稀釋後再進行實驗；另檢驗濁度較高或已知有大腸菌類的水樣時，則可利用較小體積的水樣來進行過濾。與多管發酵法相較，濾膜法有數個優點： 水樣來源 建議之過濾體積（ml） 100 50 10 1 0.1 0.01 0.001 0.0001 河水 × × × × 飲用水 × 海濱海水 × × × 游泳池水 × 井水、泉水 × × × 湖水、水庫水 × × × 供水設備之入口水 × × × 經過濾消毒之汙水 × × × 未經過處理之汙水 × × × × 短時間可獲得實驗結果。濾膜法所需時間較短，多管發酵法完整實驗至少需要四天。 試驗所用的水量較多，增加分析時的靈敏度，同時具有代表性，並可於採樣地點進行過濾，利於實驗進行。 培養基制備簡單。 水樣不需特別處理。 數據較精確，再現性高，利用已知體積的水樣接計數，計算結果立即重現，不需採統計方法。 經費較為節省。 濾膜法亦有以下缺點： 待測水樣的濁度太高（懸浮物質太多）或非大腸微生物數量（如藻類）過多時，不宜使用濾膜法檢測。主要原因是這些干擾物質會組塞濾膜，無法過濾足夠的水量進行培養，且這些濾膜組塞物質多而厚，將造成大腸菌無法充分吸收養分。 待測水樣中若存有毒性物質（如重金屬、氯及酚類物質），會被吸附或濃縮於濾膜上，抑制微生物的生長、造成實驗結果偏低，因此對某些特定來源的水樣（如工業區有毒廢水）應同時進行濾膜法及多管發酵法，以證明其可行性。 試驗時容易受環境汙染，使數據失去準確度。 濾膜法大腸桿菌群密度的計算以100ml水中總大腸桿菌群菌落數（CFU/100ml）表示之。每張濾膜以能生約50個大腸桿菌群落且總菌數以不超過200個菌落為最適宜。菌落數以下列公式計算之： 　　　　　　　　　　　　　　　　所選取之大腸桿菌群菌落數×100 大腸桿菌群密度（CFU/100ml）＝ 　　　　　　　　　　　　　　　　所有選取之過濾水樣之體積（ml） 　　倘若整片或部分濾膜長滿了大腸桿菌群菌落，以致無法分開計算，其結果以＂大腸桿菌群呈群集生長（Confluent growth with coliform）＂表示之。若群集生長者為非大腸桿菌群，也必項以“非大腸桿菌群呈群集生長”記錄之。遇此情況，則重新採樣檢測。若由濾膜上的大腸桿菌群及非大腸桿菌群之總菌落數，超過200個或濾膜上之菌落無法明顯計數，可用“太多無法計數（Too numerous to count,TNTC）”來表示之，或另採新水樣來檢測。當重新檢測時，可將100ml之水樣分成多份分別過濾，以減少因濾膜表面菌落長得過分擁擠而造成的干擾。 　　本實驗讓學生學習如何以濾膜法檢驗待測水樣中的大腸菌類數量，由實驗中利用M-Endo agar培養基或M-Endo培養液培養大腸菌類以及以大腸菌類所形成之綠色金屬光澤菌落進行計數。 設備 (一)器材 1.塑膠培養皿(直徑50mm) 2.無菌濾膜(0.45±0.02um：膜上應有格線以利計算) 3.吸收墊 4.鑷子 5.定量玻璃吸管 6.錐形瓶 7.塑膠(玻璃)滴管 8.量筒 9.取藥匙 10.