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环境微生物学实验指导书环境微生物学实验指导书 环境微生物学实验指导书环境微生物学实验指导书 艾凤祥艾凤祥 艾凤祥艾凤祥 实验一：显微镜的使用及菌体形态观察显微镜的使用及菌体形态观察 显微镜的使用及菌体形态观察显微镜的使用及菌体形态观察 一、实验目的 1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习光学显微镜的操作方法和保养。 2 、观察细菌、放线菌、真核微生物的个体形态及真菌孢子类型，学习生物图的绘制。 3、学习用压滴法制作标本片。 二、实验仪器和材料 显微镜、载玻片、盖玻片，75%二甲苯、吸管、烧杯，香柏油，擦镜纸、吸水纸、 浮游生物网 示范片：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、青霉、曲霉、根霉、梨头霉、 毛霉。 三、实验原理 （一）显微镜的结构和光学原理 显微镜分机械装置和光学系统两部分。 1、机械装置 （1）镜筒：镜筒上端装目镜，下端接转换器。镜筒有单筒和双筒两种。单筒有直立 式和后倾斜式 （倾角为45o ）。双筒都是倾斜式的，并有屈光度调节装置，以备视力不同 者调节使用。两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用。 （2 ）转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有三个孔或四个孔。不同规格的物镜旋 转安装在各孔上，在显微镜不使用时，旋下物镜，用护盖盖住。 （3 ）载物台：载物台为方形 （多数）或圆形的平台，中间有一光孔，孔的两侧各装 一个夹片，右端夹片固定，左端夹片可旋转，载物台上还有移动器 （其上有刻度标尺， 用以标记玻片的位置），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本片。 （4 ）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式 （可 改变倾斜度）两种。有弧形和折形两种。移动显微镜时用手握住镜臂进行移动。 1 （5 ）镜座：镜座为马蹄形和方形，具有一定的质量，支撑整台显微镜，马蹄形的镜 座在其上有一可旋转的反光镜。 （6 ）调节器：调节器包括粗螺旋调节器和细螺旋调节器。可调节物镜与所需观察的 物体之间的距离。 2 、光学系统及其光学原理 显微镜的总放大倍数为物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。 （1）目镜 目镜一般有10×、16×两种，高级的显微镜还有 5×和 20× 。 目镜上标有：N.A.1.25 、100×、“OI”、160/0.17、0.16 等字样，其中：N.A.1.25 为数 值孔径，100×为放大倍数，“OI” （即Oil immersion ）表示油镜、160 表示镜筒长，0.17 表示要求盖波片的厚度，0.16 为工作距离。 （2 ）物镜 物镜装在转换器的孔上，物镜镜头有低倍 （4×/5× 、10×/15×）、高倍 （40×/45× ）和油 镜（100×）。 在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响显微镜的分辨力。油镜 的放大倍数可达 100×，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光 照强度却最大。从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同，有些光线会因折射 或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因为射入的光线较少，物像显现不清。 所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折 射率 （n=1.55 ）相仿的镜油 （通常用香柏油，其折射率n=1.52 ）。 显微镜的性能依赖于物镜的分辨力，分辨力即能分辨两相邻质点之间的最小距离的 能力。分辨力用 δ 表示，δ =0.5 × λ （λ 为光波波长），分辨力与数值孔径成反比，与 N.A. 波长成正比。增大数值孔径，缩短波长可提高显微镜的分辨力，使目的物的细微结构更 清晰可见。