抑制西瓜蔓枯病菌的生防真菌筛选鉴定及发酵条件优化-生物通.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３７（５）：７６８６ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 抑制西瓜蔓枯病菌的生防真菌筛选、鉴定 及发酵条件优化 １ ２ １ １ 张旭辉 　张红楠 　李　勇 　汪文强 （１西南大学资源环境学院　重庆　４００７１５　２西南大学园艺园林学院　重庆　４００７１５） 摘要　筛选对西瓜蔓枯病菌具有抑制作用的生防真菌，优化其发酵条件以提升发酵液抑菌效果。 以平板对峙试验和摇瓶培养抑菌试验筛选拮抗真菌；根据形态学特征和 １８ＳｒＤＮＡ序列分析进行 菌株鉴定；通过扫描电镜观察对西瓜蔓枯病菌的寄生作用，以单因素试验和响应曲面法确定其最 适发酵条件，在此基础上，通过盆栽试验研究其防病效果。结果表明：在所筛选到的９株生防真菌 中Ｍ１菌株的抑菌率最高，其形态学特征与烟管菌（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａａｄｕｓｔａ）相符，１８ＳｒＤＮＡ序列分析 显示其与烟管菌在系统发育树上聚在一支，因此将菌株 Ｍ１鉴定为黑管菌属（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ）、烟管 菌。在扫描电镜下观察到烟管菌能够直接穿透西瓜蔓枯病菌菌丝，对其发酵条件优化后确定了 最佳条件组合：Ｃ／Ｎ为７．１，ｐＨ为７．４，装瓶量为４４％，时间为１９ｄ，转速为１８０ｒ／ｍｉｎ，温度为２９℃， 在此条件下抑菌率为５２．６４％，高于未经优化的抑菌率。温室盆栽中对西瓜蔓枯病菌的防病效果 达到７４．３％，高于多菌灵处理。烟管菌作为生防真菌对西瓜蔓枯病菌具有较好的抑制作用，条件 优化后进一步提升了抑菌效果，在生物防治中具有巨大应用潜力。 关键词　烟管菌　拮抗　西瓜蔓枯病菌　抑菌率　条件优化 中图分类号　Ｑ８１５ 　　由蔓枯病菌（Ｄｉｄｙｍｅｌｌａｂｒｙｏｎｉａｅ）引起的西瓜蔓枯 和土壤消毒等农艺措施虽有一定防治效果，但其生产 病是一种最重要的世界性真菌病害之一，可对至少 １２ 成本和劳动力要求较大，难以适应中国集约化农业种 ［１３］ ［９］ 属２３种的瓜类植物造成严重危害 。据统计，西瓜 植模式的要求 。生物防治因低成本、环境友好和无 蔓枯病发病株率一般为 １５％ ～２５％，严重时高达 药物残留等特点已成为当前国内外防治植物土传病害 ６０％～８０％，病害流行时可使瓜田出现大量死藤，减产 的研究热点［１０１２］，将逐步取代传统的化学防治手段。 ［４］ ［１３］ ３０％以上，严重影响作物的产量和品质 。近来日光 目前对蔓枯病菌的生防研究不断深入，Ｓｕｄｉｓｈａ等 发 温室和塑料大棚等保护设施的应用，为病原菌传播和 现生防细菌Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ能明显降低蔓枯病发生率。 ［１４］ 繁殖提供了良好的环境，致使各种植区西瓜蔓枯病菌 Ｋａｅｗｋｈａｍ等 通过枯草芽孢杆菌处理黄瓜种子后减 ［５６］ 少了黄瓜蔓枯病菌的发病率，叶面喷施也能明显降低 反复侵染，造成持续危害 ，严重制约了农业经济的 进一步发展。 病害程度。也有发现链霉菌发酵液能够明显抑制 ［７］ ［１５１６］ ［１７］ 　　目前并无理想的商品化抗病品种 ，因此主要的 Ｄｉｄｙｍｅｌｌａｂｒｙｏｎｉａｅ 。Ｍａｒｔíｎｅｚ等 研究表明，哈茨 防治方法为化学防治。但是长期大量使用杀菌剂，很