冰片对大鼠血小板胞浆内游离钙离子浓度影响.docVIP

冰片对大鼠血小板胞浆内游离钙离子浓度影响 　【摘要】 目的研究冰片对血小板内游离钙离子浓度(［Ca2+］i)的影响，以探讨其抗血小板聚集作用的可能机制。方法采用双波长Fura-2 荧光法测定血小板胞浆内游离钙离子浓度(［Ca2+］i)。结果在有无细胞外钙存在时，冰片血清均能够明显抑制5-HT诱导的血小板胞内［Ca2+］i升高（Plt;0.05）。结论冰片可抑制血小板聚集，其作用机制可能与其抑制血小板胞浆［Ca2+］i升高有关。 【关键词】 冰片； 血小板聚集； 钙； 5-羟色胺 ChinaAbstract：ObjectiveTo investigate the effect of bornel on cytoplasmic free calcium level in rat platelets and its possible mechanism of anti-platelet aggregation.MethodsPlatelet［Ca2+］i was determined by double beam fluorescence spectrophotometric method.ResultsWith or without the presence of extracellular Ca2+， bornel inhibited the increased ［Ca2+］i induced by 5-HT. Conclusion Bornel markedly inhibits the platelet aggregation， and its mechanism may be related to its depression on the rise of platelet ［Ca2+］i．Key words： Ornel； Platelet aggregation； Free Calcium； Serotonin 　　冰片为龙脑香的树脂和挥发油的加工成品，味辛苦，性微寒，具有开窍醒神，清热止痛的功效。临床上，在许多心脑血管疾病的治疗方剂中均作为主要药物配伍使用，现有文献记载的治疗心血管疾病的复方中，有三十余首含有冰片，其中8首已被2005年版《中国药典》收录。我们前期研究显示，冰片能够抑制模型动物动脉血栓形成，对5-羟色胺诱导的血小板聚集具有抑制作用。因此，本研究采用双波长Fura-2 荧光法测定血小板胞浆游离钙离子浓度(［Ca2+］i)的方法，考察冰片对大鼠血小板胞浆游离钙离子浓度的影响，探讨冰片抑制血小板聚集的作用机制，为冰片的合理应用提供实验依据。 　　1 器材 　　1.1 动物健康清洁级SD大鼠，雄性，体质量250～300 g，广东省医学实验动物中心提供，合格证号 2005A010。 　　1.2 药材及试剂冰片，广州市药材公司中药饮片厂，批号经GC-MS测定龙脑含量为56.20％ ，为合成冰片；Fura-2/AM 由日本Dojindo公司提供，用二甲基亚砜（DMSO）溶解成1mmol/L，分装，-20℃避光保存；二甲基亚砜（DMSO）、羟乙基哌嗪乙磺酸（Hepes）均为Amersco公司产品；牛血清白蛋白（BSA），由华美生物工程公司提供；Amresco公司产品；5-羟色胺硫酸肌酐，sigma公司产品，用0.1 mol/L HCl溶液溶解后，用Tris-NaCl溶液调pH为7.4，分装，-70℃避光冻存；乙二醇双（2-氨基乙基）醚四乙酸（EGTA），MBCHEM公司产品，用新鲜配制的1 mol/L NaOH配制成0.5mol/L的溶液（pH8.5）；TritonX-100，Amresco公司产品，用三蒸水配成20％的溶液；ACD溶液含柠檬酸钠89 mmol/L、柠檬酸16 mmol/L、葡萄糖243 mmol/L；无Ca2+的Hepes缓冲液含NaCl 140 mmol/L、KCl 3 mmol/L、MgSO4 1 mmol/L、Hepes 10 mmol/L、葡萄糖10 mmol/L，用1mol/L NaOH调pH7.40； 血小板负载液含NaCl 140 mmol/L、KCl 3 mmol/L、MgSO4 1 mmol/L、Hepes 10 mmol/L、葡萄糖10 mmol/L，0.4%BSA，用1mol/L NaOH调pH7.40，使用前预先通氧饱和；其它均为国产分析纯，所有试剂均用新鲜制备的三蒸水配制。 　　1.3 仪器LS-55 荧光分光光度计，美国Perkin-Elmer公司产品。 　　2 方法 　　2.1 冰片含药血清的制备取雄性SD 大鼠20 只，随机分为冰片组和溶剂对照组，每组10 只。冰片组灌服冰片粟米油溶液（1.5 g·kg-1）15 ml·kg-1，给药1 次，