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第七章 克隆基因的的表达及基因干扰
第七章 克隆基因的表达及基因干扰;第七章 克隆基因的表达及基因干扰;第一节 外源基因的表达;第一节 外源基因的表达;一、原核生物表达体系;一、原核生物表达体系; 选择标志 启动子 翻译起始点和终止序列 多克隆位点 ;一、原核生物表达体系; 1.非融合型表达蛋白 优点:表达的非融合蛋白与天然状态下存在 的蛋白在结构、功能以及免疫原性等 方面基本一致 缺点:易被细菌蛋白酶破坏 ;常用的非融合型表达蛋白表达原核载体pKK223-3 抗氨苄青霉素基因 Tac启动子 SD序列 AUG起始密码 转录终止序列T1和T2 ;一、原核生物表达体系;一、原核生物表达体系;一、原核生物表达体系;(四)包涵体;二、真核生物表达体系;二、真核生物表达体系;二、真核生物表达体系;二、真核生物表达体系;二、真核生物表达体系;(二)哺乳动物细胞表达体系;二、真核生物表达体系; 3.哺乳动物细胞的瞬时表达 和稳定表达系统 (1)COS细胞瞬时表达系统 (2)CHO细胞稳定表达系统 ;第二节 表达产物的分离、纯化与鉴定;第二节 表达产物的分离、纯化与鉴定;一、大肠杆菌重组表达蛋白的分离与纯化 ;二、酵母重组表达蛋白的分离与纯化 ;三、表达产物的鉴定;四、表达产物的鉴定;四、表达产物的鉴定;四、表达产物的鉴定;第三节 基因表达干扰技术;第三节 基因表达干扰技术;一、反义核酸技术;一、反义核酸技术;一、反义核酸技术;一、反义核酸技术;一、反义核酸技术;一、反义核酸技术;一、反义核酸技术;一、反义核酸技术;(二)反义RNA技术;一、反义核酸技术;(三)反义核酸技术的应用;二、核酶与脱氧核酶;二、核酶与脱氧核酶;二、核酶与脱氧核酶; 2.核酶的结构 (1)锤头状核酶: 二级结构有三个 螺旋环结构区和 一个催化中心 ;(2)发夹形核酶: 每个结构域由 螺旋-环-螺旋组成 ;二、核酶与脱氧核酶;二、核酶与脱氧核酶;二、核酶与脱氧核酶;二、核酶与脱氧核酶;二、核酶与脱氧核酶;4.脱氧核酶的应用 为治疗RNA病毒感染的疾病提供了一条新途径 ;三、小干扰RNA;(一)一般研究路线;三、小干扰RNA;三、小干扰RNA;;三、小干扰RNA;三、小干扰RNA;三、小干扰RNA;三、小干扰RNA;siRNA的合成方式及特点;三、小干扰RNA;四、微RNA;四、微RNA;四、微RNA;四、微RNA;四、微RNA;siRNA与microRNA的不同;四、微RNA
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