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生物安全柜的选择、使用及维护 李 仁 清 博士 北京市疾病预防控制中心 依 据 GB 19489—2007《实验室生物安全通用要求》 《实验室生物安全手册》（第三版，2004） ISO 15190—2003《医学实验室—安全要求》 YY0569-2005 生物安全柜（2005.7.18） JG170-2005 生物安全柜（2005.3.25） 实验室生物安全指南（第三版，2004） 生物危害一级防护：生物安全柜的选择、安装和使用（第二版，2000.9） 微生物和生物医学实验室生物安全手册（第四版，1999.4） 目 的 掌握生物安全柜的选择、放置、使用和维护 熟悉生物安全柜的检测方法 需要解决的六个问题 为什么选择生物安全柜？ 选择什么样的生物安全柜？ 怎样放置生物安全柜？ 怎样使用生物安全柜？ 怎样维护生物安全柜？ 怎样检测生物安全柜？ 选择生物安全柜的理由 工作对象具有生物危害 原代培养物、菌毒种以及诊断性标本等 -------具有潜在感染性的实验材料 属于《人间传染的病原微生物名录》中第一、二、三和四类微生物 人间传染的病原微生物名录 类与级对应表 ------GB19489-2004《实验室生物安全通用要求》 选择生物安全柜的理由 容易产生气溶胶的工作行为 对液体或半流体进行摇动、倾注或搅拌操作时， 将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时， 在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶， 采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板中， 对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡， 对感染性液体进行离心， 进行动物操作时。 选择生物安全柜的理由 生物安全柜能够阻止工作中所产生的气溶胶对外环境或者操作者本身产生危害，还可以减少样本之间由于气溶胶产生的交叉污染。 生物安全柜基本工作原理 定向气流： 风幕 HEPA滤器： 一种一次性使用， 框架内有多重褶迭 的干性过滤材料的过滤器，对0.3微米气溶胶的过滤效 能达到99.97%。 保证排出气体和内循环气体的无菌状态。 生物安全柜的选择 要素： 样品的生物危害 第一、二、三和四类病原微生物 保护样品 I级生物安全柜不保护样品 其他 是否涉及到挥发性、放射性核素或化学品 生物安全柜的选择（一） 生物安全柜的选择（二） II级A2型生物安全柜 生物安全柜的选择（三） 生物安全柜的宽度：工作需要；空间 费用：安全柜本身；运输费用；附件费用（支架，紫外灯，椅子等）；排风和送风系统： 风机和管道（II级B2） 认证： NSF 49 美国 EN12469 欧洲 YY0569－2005 中国 生物安全柜放置 五个远离点（气流） 门 风扇 空调 开着的窗户 人员活动频繁的区域 摆放要求 稳固的平台或支架 两侧、后面和上端留30cm 反面 生物安全柜的使用要求 个人防护要求 柜内物品的摆放 紫外灯 明火 工作前准备 工作中操作及溢出处理 工作结束后处理 生物安全柜的使用 个人防护要求： 在使用生物安全柜时必须穿个人防护服，戴手套（手套应套在隔离衣的外面） 最好带口罩和帽子，根据需要带防护眼罩或者面罩。 生物安全柜的使用 生物安全柜内物品摆放原则 按照从洁净区到污染区的方向摆放 所有物品尽可能放在工作台后部 将废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品放在柜内某一侧 前进气格栅不能被纸、仪器设备或者其他物品阻挡 生物安全柜的使用 生物安全柜的使用 生物安全柜的使用 避免使用明火，原因有三： 明火可造成生物安全柜的气流紊乱，干扰气流模式 可损坏HEPA过滤器 处理挥发性物品和易燃物品时易造成危险 生物安全柜的使用 工作前需要准备的内容： 首先紫外灯照射30分钟 关紫外灯，打开安全柜的日光灯和风机，用消毒剂对生物安全柜的内表面进行消毒擦拭 将实验中需要用到的物品集中用消毒剂擦拭后放在台面相应位置上（切记勿阻挡风口！） 等待5min，净化工作区的空气污染物 生物安全柜的使用 工作时操作规范： 双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。 所有操作应在离前窗10cm以外的工作区进行。 废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中 生物安全柜的使用 操作时注意事项： 避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出。 尽量避免污染的物品进入洁净区。 在生物安全柜内进行操作时，不能进行文字工作。 尽量减少操作者身后的人员活动。 生物安全柜的使用 溢出处理： GB19489—20