出口食品中大肠菌群粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法.docVIP

出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法 食品商务网 2005-12-14 12:00:00.0 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0169-92 代替 ZB X09 002一88 Method for examination of coliform, fecal coliform and escherichia coli in food for export 1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。 本标准适用于出口食品的检验。 2 设备和材料 2.1 吸管: 1mL,具0.1mL刻度；5mL和10mL,具1mL刻度。  2.2 水浴箱：44.5±0.5℃。 2.3 培养箱：36±1℃,44.5±0.5℃。 2.4 冰箱: 0~5℃和-15~-20℃。  2.5 均质器。  2.6 乳钵和研棒。 2.7 平皿：直径90mm。 2.8 天平：感量0.1g。  2.9 显微镜。  2.10 稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。 2.11 玻璃珠：直径约5mm。  2.12 菌落计数器。  3 培养基及试剂  3.1 月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤。  3.2 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。  3.3 EC 肉汤。 3.4 伊红美蓝琼脂(EMB)。  3.5 营养琼脂斜面。  3.6 色氨酸肉汤。  3.7 MR-VP培养基。  3.8 Korser氏枸椽酸盐肉汤。  3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。  3.10 Butterfield 氏磷酸盐缓冲稀释液。  3.11 生理盐水。  3.12 革兰氏染色液。  3.13 Kovacs氏靛基质试剂。  3.14 甲基红指示剂。  3.15 Voges-pros kauer(V-P)试剂。 4 样品制备  4.1 以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验,应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品,应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2~5℃ 18h内解冻,或在45℃以下15min内解冻。 4.2 不同食品样品匀液的制备  4.2.1 液体食品 以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠), 以30cm幅度、于7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。 4.2.2 固体和半固体食品 以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1~2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。  4.3 稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。  5 大肠菌群的测定  5.1 大肠菌群MPN值的测定  5.1.1 对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。  5.1.2 将接种管置于36±1℃培养48±2h。  5.1.3 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生,记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。如所有LST肉汤管均未产气,则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者,则进一步作证实试验。  5.2 大肠菌群的证实试验  5.2.1 将所有产气管用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中。 5.2.2 置BGLB肉汤管于36±1℃培养48±2h。  5.2.3 记录所有BGLB肉汤管的产气管数。  5.2.4 结果报告：按BGLB肉汤产气管数,查MPN表[见附录B (补充件)]报告每克(毫升)样品中大肠菌群的MPN值。 6 粪大肠菌群测定  6.1 用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。  6.2 将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5℃