金鱼雌核发育单倍体发育过程中的比较蛋白质组学研究.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（８）：７８～８３ 金鱼雌核发育单倍体发育过程中的比较蛋白 质组学研究 １，２ １ ２ １ 张　玲 　周新文 　谢锦云 　黄树林 （１广东药学院生命科学与生物制药学院　广州　５１０００６） （２湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学实验室　长沙　４１００８１） 摘要　前期已有工作发现在金鱼雌核发育单倍体中一些与发育调控相关的重要蛋白质表达受阻 导致单倍体的发育畸形。为了进一步阐明单倍体的发育机制，共收集了３个不同发育时期金鱼单 倍体胚胎（ＨＥ１、ＨＥ２、ＨＥ３）进行雌核发育单倍体的差异蛋白质组研究。研究采用二维凝胶电 泳进行分离，利用ＰＤＱｕｅｓｔ软件进行图谱分析，质谱分析初步鉴定到了１５个差异蛋白质。这些蛋 白质在金鱼雌核发育单倍体的发育中起着重要作用，为进一步阐明单倍体的发育机制奠定了良 好的基础。 关键词　金鱼胚胎　发育过程　双向电泳　蛋白质组 中图分类号　Ｑ２９７　Ｑ５１ 　　蛋白质组学是后基因组时代蓬勃发展的技术体 一些与眼睛发育、神经发育、发育调控等相关的重要蛋 系，其特点是采用高通量、高分辨率的蛋白质鉴定技术 白质，在蛋白质水平上初步解释了单倍体发育畸形的 和全景式研究在特定条件下的蛋白质表达谱，并由此 现象。 在蛋白质水平上获得对组织发育、疾病发生、细胞代谢 　　为进一步阐明单倍体的这种畸形发育机制，我们 等过程整体而全面的认识［１］。高分辨率的蛋白质双向 取金鱼雌核发育尾鳍出现期（为受精后３１个小时）的 凝胶电泳和高灵敏度质谱技术相结合是蛋白质水平研 单倍体胚胎为材料，每隔２个小时为一个时期，共提取 ［２］ 了３个时期的胚胎全蛋白质进行蛋白质组分析，旨在 究的强有力武器 。 ［３］ 揭示雌核发育单倍体胚胎发育过程的蛋白质表达差异 　　Ｌｕｏ等 报道在基因组相同的纯合的金鱼雌核发 育单倍体和二倍体胚胎发育过程中，一些金鱼雌核发 变化。 育单倍体胚胎基因表达缺陷，表现为不正常发育，尤其 １　材料和方法 在眼睛和背脊出现畸形，虽能发育到孵化阶段，但所有 的单倍体不能发育到饲养阶段，而二倍体能发育正常。 １．１　材　料 根据统计学分析，罗琛等对脊椎动物的眼睛发育时空 　　金鱼胚胎（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓ），属于鲤科动物。 模式提出了一个二倍体依赖的基因表达调控机制。 １．２　试　剂 ［４］ 　　固相ｐＨ梯度干胶条（ｐＨ３～１０，１８０ｍｍ ×３ｍｍ 　　Ｈｕａｎｇ等 采用蛋白质组的研究技术，对金鱼雌核 发育眼睛形成期（受精后２６个小时）的单倍体胚胎 ×０．１５ｍｍ）、载体两性电解质（ｐＨ３～１０）、ＩＰＧ缓冲 （ＨＥ）进行研究，以同时期二倍体胚胎（ＤＥ）为对照，研 液、覆盖液、过硫酸铵、ＰＭＳＦ、考马斯亮蓝 Ｒ２３５０、二硫 究分析得到了单倍体上未能被选择表达或表达受阻的 苏糖醇（ＤＴＴ）等产品购自Ａｍｅｒｓｈａｍ公司；丙烯酰胺、 Ｎ，Ｎ′２亚甲基双（丙烯酰胺）、甘氨酸、十二烷基硫酸 收稿日期：２００８０３１７　　修回日期：２００８０５１９ 国家自然科学基金、国家“９７３”计划（２００１ＣＢ５１２０）、 钠（ＳＤＳ）、三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ）、尿素、甘油、 资助项目 ＣＨＡＰＳ等为Ａｍｒｅｓｃｏ公司产