乙肝血清标志物及HBV-DNA定量检测结果研究.docVIP

乙肝血清标志物及HBV-DNA定量检测结果研究【摘要】 目的 探讨乙肝血清标志物与HBV-DNA定量检测结果并分析。方法 2009年1月至2011年1月门诊诊治的乙型肝炎患者167例进行乙肝血清标志物与HBV-DNA定量检测。结果 HbsAg+、HBeAg+、抗-HBc+HBV DNA 阳性率100%；HbsAg+、抗-HBe+、抗-HBc+、HBV DNA 阳性率51.7%。结论 乙肝血清标志物是免疫学标志物是诊断乙型肝炎最传统的指标，HBV DNA检测已经成为乙型肝炎诊断和疗效评价的指标，与乙肝标志物的检测结果综合比较，有助于判断其传染性和观察临床治疗效果。? 【关键词】 乙肝血清标志物; HBV-DNA定量检测;结果分析 乙型肝炎是我国感染率和发病率最高的传染病之一， 目前乙型肝炎的诊断及疗效判断常用指标有乙肝病毒荧光定量PCR、血清免疫学标志物。血清标志物(乙肝两对半)组合模式多样且复杂这导致临床上部分患者的HBV 感染复制状况难以判断, 甚至漏检,外周血中HBV-DNA 是病毒复制活跃最直接和可靠的标志。我们对乙肝血清标志物与HBV-DNA定量检测结果相关性进行分析，现汇报如下。? 1 材料及方法? 1.1 一般资料 选取2009年1月至2011年1月门诊诊治的乙型肝炎患者167例，所有病例均符合1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议病毒性肝炎防治方案，乙型肝炎诊断标准；其中男97例，女70例；年龄21~78岁，病程6个月至5年。? 1.2 方法 ? 1.2.1 标本 本组病例抽取空腹静脉血2管，每管3 ml，分别进行乙肝血清标志物和HBV-DNA定量检测。? 1.2.2 仪器及试剂 乙肝五项定性试剂为上海科华实业有限公司，酶标仪AUTHOS LUCY-2，乙肝DNA扩增仪是上海宏石全自动SLAN全自动荧光定量PCR检测系统，试剂是上海之江有限公司。? 1.2.3 检测方法 乙肝血清标志物：采取ELISA 法检测中其操作及结果判断均严格按试剂盒说明书进行。? HBV DNA 定量检测采用荧光定量PCR,样品经常规裂解法从血清中提取HBV DNA,加入到已配制好的PCR 反应管中(试剂盒中已备有),同时设置阴性对照和阳性定量梯度对照,放入PCR 仪中,按使用说明的PCR 程序(93 ℃2 min预变性,93 ℃45 s,55 ℃120 s) 进行40个循环,反应结束后,通过电脑分析直接定出定量结果。所有检测均由同批检测人员进行操作及分析。HBV-DNA 正常参考值为＜10?3copy/ml，≥10?3 IU ／ mL 判为阳性，＜10?3 IU ／ mL 判为阴性［1］。? 2 结果? 2.1 乙肝血清标志物 对本组167例乙型肝炎患者乙肝血清标志物检测，分出A组51例、B组60例、C组9例、D组5例、E组11例、F组31例，各组具体标志物显示见表1。? 2.2 乙肝血清标志物与HBV-DNA定量检测结果 观察各组病例HBV-DNA定量检测结果并观察乙肝血清标志物与HBV-DNA定量阳性率，具体见表2。? 3 讨论? 乙肝血清标志物是免疫学标志物是诊断乙型肝炎最传统的指标，ELISA 方法是临床诊断HBV 感染的传统手段,它操作简便,省时,但敏感性和特异性一般。且实际检测的是人体对HBV 的免疫反应状态，不能直接反映HBV 复制的真实状况，存在一定的局限性。? 随着分子生物技术的发展,病毒感染的临床诊断技术已从定性检测发展到定量检测。从核酸分子杂交技术到定量PCR 技术检测HBV dNA,其灵敏度和特异性不断提高,且在研究病毒感染量与临床病情的关系、评价和监测抗病毒药物疗效等方面具有重要指导作用。HBV DNA 是直接反映H BV 存在、病毒活动性复制、传染性大小的直接指标, 是判断患者病情变化及病毒突变株的主要指标。? HBV 感染者的血液中存在3 种HBV 颗粒［2］， 即小球形颗粒、管形颗粒和Dane 颗粒。ELISA 检测的是前两种颗粒包膜表面的一种小蛋白，与病毒复制能力、传染性无关；PCR 检测的才是核衣壳内具有复制能力的核酸DNA 成分，HBV-DNA定量检测和ELISA 检测无论是检测方法和检测物质都不同，它们是以不同的角度去评价乙肝病毒感染者的感染状况。? HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)时,结合PCR检测的阳性结果表明,乙肝病毒在体内复制活跃,疾病处于活动期,具有较强的传染性；HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)其HBV-DNA阳性的拷贝数对数均值低于大三阳对数均值，可能是患者中部分出现HBV前C区基因发生突变而使HBeAg不能表达,但不影响病毒