活血化瘀方剂对急性高眼压大鼠视网膜损伤保护和对BDNF表达变化影响.pdfVIP

引言 引 言 青光眼是由于眼压升高而引起视乳头损害及视野缺损的一组不可逆性致盲性眼 病，其致盲的主要原因是视神经损害及由此引起的视野损害。组织学和电生理学研 究表明，视网膜神经节细胞(retinalganglioncells，RGCs)是青光眼受损的主要神 经元，而RGCs和轴突的退变可引起视乳头凹陷。所有可能造成RGC凋亡的因素如谷氨 酸毒性、神经营养因子剥夺、血管异常、胶质细胞活化及一氧化氮的毒性等，均可能 与青光眼的病变有关Ⅲ。因此，提出了青光眼视神经保护的概念㈣1。视神经保护也 成了现代眼科学领域研究的热点及难点。 神经营养因子剥夺是诱发青光眼RGCs凋亡的因素之一。神经营养因子是一种小 肽片段，其与RGCs相连，通过分子和激酶途径，调控细胞的新陈代谢，是神经组织 生长发育所必需的因子。脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophin factor，BDNF)是神经营养因子家族的重要成员之一。它主要由脑组织合成，是一种 靶组织源性神经营养因子旧，其靶组织位于周围神经系统中。在视觉系统中，BDNF 主要分布在虹膜、睫状体、视网膜、视神经项盖区和上丘。在视网膜内，BDNF主要 表达于RGCs层和内核层，并且对RGCs的生存起重要作用。而在双栖动物视觉系统发育 过程中，BDNF除了靶源性外尚有自分泌和旁分泌作用№1，而RGCs层的无长突细胞可 能是其主要来源n1。它对视网膜和视神经损伤如视网膜缺血及化学性损伤、光感受 器细胞损伤后的恢复及再生等方面具有十分重要的作用口1，尤其是对RGCs的生存有 着重要的作用。当视神经损伤或急性眼压升高时，视网膜内BDNF的逆向轴突运输被阻 断呻一训，由此引起逆行运输供应RGCs营养的神经营养因子不足，导致RGCs发生凋亡。 近年来，通过大量临床和基础研究，许多西药如神经营养药、谷氨酸拈抗药、钙通道 阻滞剂、一氧化氮(NO)合成酶抑制药等已用于外伤性视神经损伤的实验和临床研究， 但其毒副作用较明显…1。单味中药及其提取物或其复方具有清除自由基，扩张微血管， 改善微循环等作用，从治疗效果和不良反应等方面考虑，中药治疗视神经损伤较西药 更具综合优势。但目前用于实验和临床研究的中药多为单味中药或其提取物，其疗 效并不十分显著。我们假设中药组方有可能从整体和多方位对人体进行调理，从而能 满足多途径和多环节RGCs的保护要求。本实验所用活血化瘀方剂由生地、当归、川 芎、桃仁、红花、栀子、丹参、泽兰、茺蔚子、丹皮、甘草等组成，其各种有效成 分相辅相成，从药理学方面，它有着更加显著的活瘀化瘀功能，能显著扩张微血管， 有效改善微循环。因此，本实验对临床上开发研制理想的视神经保护中药有着重要 的指导意义。 目前，国内外对中药在青光眼视神损伤保护方面的研究还处于起步阶段，中药 对视神经保护的物质基础、作用机制等方面还有待进一步研究。为深入研究这一领 域，我们通过建立急性高眼压动物模型，之后给予活血化瘀方剂灌胃治疗，通过光 青岛大学硕士学位论文 镜从组织形态方面观察药物治疗前后受损视网膜的状况，明确活血化瘀方剂对青光 眼性视神经损伤的保护作用，同时通过荧光免疫组织化学方法、实时定量逆转录聚 合酶链反应(Real—Time qRT—PER)技术分别从蛋白质水平及mRNA水平上检测治疗前 后视网膜内BDNF的表达变化，从而分析活血化瘀方剂对视神经保护的物质基础和可 能的作用机理，为临床上研发理想的视神经保护中药提供实验和理论基础，也希望 能为青光眼性视神经损伤的中药现代化治疗开辟新的领域。 2 第一章材料与方法 第一章材料与方法 1实验材料 1．1实验动物 健康成年清洁型Wi 中心提供，检眼镜检查双眼视网膜正常，于青岛大学医学院附属医院动物实验室(SPF 级)饲养。实验动物及实验条件均符合国家科学技术委员会的《实验动物管理条件》。 1．2主要实验仪器设备 (1)低温离心机 美国Sigma公司 (2)OLYMPUS光学显微镜 日本OLMPUS公