小分子rna干扰组织因子在新生猪胰岛细胞中的表达sirna.pdfVIP

中南大学学报（医学版） 　２０１１，３６（１２）　　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｓｕｍｅｄ．ｏｒｇ；ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｘ．ｘｙｓｍ．ｎｅｔ ＪＣｅｎｔＳｏｕｔｈＵｎｉｖ（ＭｅｄＳｃｉ） １１４１ 小分子ＲＮＡ干扰组织因子在新生猪胰岛细胞中的表达 １ ２，３ ２ ２ 暨明 ，易受南 ，于德玲 ，王维 （１．中南大学基础医学院生理学系，长沙４１００７８；２．中南大学湘雅三医院 细胞移植与基因治疗中心，长沙４１００１３；３．澳大利亚悉尼大学 Ｗｅｓｔｍｅａｄ医院移植与肾病研究中心，悉尼２１４５，澳大利亚） ［摘要］　目的：利用小分子ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）在基因水平对新生猪胰岛细胞进行修饰，抑制细胞组织因子的 表达。方法：设计５对ｓｉＲＮＡ转染新生猪胰岛细胞，用ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ方法筛选组织因子基因沉默效果最好的 ｓｉＲＮＡ或组合，同时流式细胞仪检测ｓｉＲＮＡ转染对细胞活性的影响，ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ和流式细胞仪分别检测细 胞组织因子的基因及蛋白沉默水平。结果：根据ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ结果筛选出组织因子基因沉默效果最好的３对 ｓｉＲＮＡ组合，转染新生猪胰岛细胞后，ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ及流式细胞仪检测新生猪胰岛细胞组织因子的基因沉默 效率达６０％，蛋白表达水平降低约５０％，同时流式细胞仪检测结果提示ｓｉＲＮＡ转染对新生猪胰岛细胞的活性 没有明显的影响。结论：３对ｓｉＲＮＡ组合在体外特异性抑制新生猪胰岛细胞组织因子的表达。 ［关键词］　 ｓｉＲＮＡ；　组织因子；　新生猪胰岛细胞 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２７３４７．２０１１．１２．００３ ｓｉＲＮＡｍｅｄｉａｔｅｄｔｉｓｓｕｅｆａｃｔｏｒｋｎｏｃｋｄｏｗｎｉｎ ｐｏｒｃｉｎｅｎｅｏｎａｔａｌｉｓｌｅｔｃｅｌｌｃｌｕｓｔｅｒｓｉｎｖｉｔｒｏ １ ２，３ ２ ２ ＪＩＭｉｎｇ，ＹＩＳｈｏｕｎａｎ ，ＹＵＤｅｌｉｎｇ，ＷＡＮＧＷｅｉ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００７８，Ｃｈｉｎａ； ２．ＣｅｌｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎａｎｄＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＴｈｉｒｄＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００１３，Ｃｈｉｎａ；３．ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎａｎｄＲｅｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔｍｅａｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＳｙｄｎｅｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｙｄｎｅｙ２１４５，Ａｕｓｔｒａｌｉａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｎｎｅｏｎａｔａｌｐｏｒｃｉｎｅｉｓｌｅｔｃｅｌｌ ｃｌｕｓｔｅｒｓ（ＮＩＣＣ）ｂｙｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）ｍｅｄｉａｔｅｄｔｉｓｓｕｅｆａｃｔｏｒ（ＴＦ）ｋｎｏｃｋｄｏｗｎｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＰｏｒｃｉｎｅＮＩＣＣｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈ５ｐａｉｒｓｏｆｄｅｓｉｇｎｅｄｓｉＲＮＡｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｏｒｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｗｉｔｈｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００．ＴｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＮＩＣＣｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｆｏｒＴＦｇｅｎｅｂｙｒｅ ａｌｔｉｍｅＰＣＲｔｏｓｅｌｅｃｔｔｈｅｓｉＲＮＡｗｈｉｃｈｗｏｒｋｅ