泰国和海南方斑东风螺及其杂交子代遗传多样性研究.docVIP

泰国和海南方斑东风螺及其杂交子代遗传多样性研究 海南大学海洋学院，海洋生物实验教学中心，海南 海口， 570228 摘要：本研究采用RAPD技术对方斑东风螺[Babylonia areolata (Lamarck)]泰国群体和海南本地群体及其杂交子代的遗传多样性进行了研究。研究结果显示，目前养殖的方斑东风螺仍具有较高的遗传多样性。杂交子代 关键词：方斑东风螺；海南种群；泰国种群；杂交子代；RAPD Thailand’s, Hainan’s and their hybrid offspring of Babylonia areolata by RAPD analysis Abstract：Using molecular marker RAPD technique, the genetic diversity of three groups of Babylonia areolata (Thailand group, Hainan group and hybrid offspring of Thailand’s group♀×Hainan’s group♂ ) were studied. The results indicated that the cultured B. areolata still has a high genetic diversity. The hybrid F1 has a relative genetic similarity of 0. 8862 and 0. 8707 from Hainan group and Thailand group, separately. The hybrid F1 has a genetic distance of 0.1208 and 0.1400 from Hainan group and Thailand group, separately. The later is farther than the former, which elucidates that the hybrid F1 has an unequal heredity difference to its parents and a genetic inclination to its paternity. Keywords: Babylonia areolata; Hainan group; Thailand group; hybrid offspring; RAPD 杂交是增加生物变异性以及产生杂种优势的一个重要方法[1]，评估杂交后代的遗传多样性，除了传统的形态标记分析外，目前多采用DNA分子标记技术。如张国范等对皱纹盘鲍中国群体和日本群体的自交与杂交的F1进行了RAPD标记检测，结果发现，各家系子代群体倾向于父本基因型的几率稍大，即雄性遗传占主导地位，认为在生产中只要引进雄性亲本与本地群体杂交即可获得杂种优势[]。万俊芬等对日本盘鲍、皱纹盘鲍及其二者的正反杂交子代的基因组DNA进行RAPD标记分析，发现杂交子代与两亲本的遗传距离是不对等的，而是更偏向日本盘鲍[]。李红蕾采用来自韩国野生的栉孔扇贝和中国养殖的栉孔扇贝以及发病区存活个体作亲本，构建4杂交组合，用RAPD标记对F1不同群体的遗传结构进行比较，结果发现杂交后代具有明显的生长优势，说明栉孔扇贝种内不同群体间存在杂种优势[]。 目前，国内外的学者对方斑东风螺[Babylonia areolata（Lamarck）]的研究主要集中在繁殖生物学、幼体生理生态学、成体摄食生理生态学、生长发育特征和病害防治等方面，而对2个以上地理种群方斑东风螺的遗传差异分析和由分子标记辅助的方斑东风螺杂交育种的研究国内外尚未见报道。因此，进行方斑东风螺两个地理群体杂交子代遗传多样性的研究具有重要的理论与应用意义。 1 材料与方法1.1实验材料 实验所用海南、泰国及其杂交子代采自庚申东风螺养殖场。每个群体取30只螺。取其腹足于盛满无水乙醇的5ml离心管中，并置-20℃保存。S221~S240 、S301~S320、S421~S440系列。 1.3　实验方法 DNA提取：参考Sambrook等的酚/氯仿抽提法[5]. PCR反应体系：反应体积为25μL，其中含10×PCR buffer2.5μL，25 mmol/L Mg1.5μL，25 pmol/L引物1μL，2.5 mmol/L dNTP 1μL，DNA模板25 ng，rTaq酶0.6 U，无菌重蒸水(ddw)补足25μL。PCR 循环参数：94 ℃预变性4min；然后94 ℃ 30 min，37 ℃ 45 min，72 ℃ 1.5min，循环扩增40次；最后72 ℃延伸7min，于4 ℃结束反应。PCR