微生物基本操作讲义幻灯片.ppt

微生物检测的基本操作知识 主要内容： § 1　清洗、消毒和灭菌 § 2　显微操作 § 3　制片和染色 § 4　培养基的制备 § 5　接种、分离纯化和菌种保存 § 6　微生物常规鉴定技术　 § 1 　清洗、消毒和灭菌 消毒灭菌的方法 （一）物理消毒灭菌法 （二）化学消毒法 （一）物理消毒灭菌法 1.热力灭菌法 　　　热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大类。在同一温度下， 后者效力比前者为大，这是因为： （1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固； （2）湿热的穿透力比干热大； （3）湿热的蒸汽有潜热存在。水由气态变为液态时释放出的潜热，可迅速提高被灭菌物体的温度。 加热灭菌和加热消毒的方法： 干热灭菌法 火焰灭菌法 干燥加热空气灭菌法 高温灭菌 巴氏消毒法 常压下 煮沸消毒法 湿热灭菌法 间歇灭菌法 常规加压灭菌法 加压下 (高压蒸汽灭菌法) 连续加压灭菌法 干热灭菌法 1.焚烧：是一种彻底的灭菌方法，但仅适用于废弃物品或尸体等。 2.烧灼：直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌（图3-2）。 3.干烤：用烤箱灭菌。一般加热至160℃～170℃经2小时。适用于高温下不变质、不蒸发的物品， 如玻璃器皿、瓷器等。。 湿热灭菌法 1.煮沸法：1个大气压下，煮沸的水温为100℃，一般细菌繁殖体煮沸5分钟即被杀死。细菌芽胞常 需煮沸1～２小时，才被杀死。水中加入 2%碳酸钠，既可提高沸点达105℃，促进细菌芽胞的杀灭，又 可防止金属器皿生锈。 2.巴氏消毒法（pasteurization）:用较低温度杀灭液体中的病原菌、同时又不影响消毒物品的营 养成分及香味的消毒方法。加热61.1～62.8℃半小时即可，常用于牛奶和酒类等的消毒。 2.紫外线与射线灭菌法 1.紫外线：紫外线波长为240～280nm时具有杀菌作用，其中 以260nm最强。紫外线杀菌机理主要是作用于细菌DNA，使同一条DNA 链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体，因而改变DNA的分子构型，干扰细菌DNA的复制与 转录，导致细菌的死亡或变异。紫外线穿透力差，故只适用于空气及不耐热物品的表面消毒。 2.电离辐射：高速电子、X 射线和γ射线等在足够剂量时，对各种细菌均有致死作用。其机制在于 产生游离基，破坏细菌DNA。电离辐射常用于大量一次性医用塑料制品的消毒。 3.滤过除菌 　　滤过除菌是用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到无菌的目的。所用的器具是滤菌器（filter）。 　　　滤过除菌主要用于一些不耐高温灭菌的血清、细菌毒素、抗生素，以及空气等的除菌。 　　　滤菌器的种类很多，目前常用的有滤膜滤菌器、石棉滤菌器（亦称Seitz滤菌 器）、玻璃滤菌器等。 （二）化学消毒法 　　　用化学药品进行消毒的方法，由于化学药品对细菌及人体都有毒性，故只能用于体表、医疗器械及周围环境等的消毒。 杀菌机制： （1）使菌体蛋白质变性或凝固； （2）干扰细菌的酶系统和代谢； （3）影响细菌胞浆膜的通透性。 影响消毒灭菌效果的因素 1.消毒剂的性质、浓度和作用时间：一般情况下浓度越大，作用时间越长，杀菌效果越好。但95%的 乙醇消毒效果反不如75%为好，因为高浓度乙醇使细菌表面的蛋白质迅速脱水而凝固，影响乙醇进入菌体内，减弱其杀菌作用。 2.微生物的种类与数量：同种消毒剂对不同微生物的杀菌效果不同。如结核杆菌对酸、碱的抵抗力 比其他的菌强；70%乙醇可杀死一般细菌繁殖体，但不能杀灭细菌芽胞。因此，必须根据消毒对象选择合适的消毒剂。 3.环境中有机物的影响：消毒环境中如有有机物存在，如血清、脓汁、痰、粪便等，可与消毒剂结合而影响杀菌效果。 § 2　显微操作 显微镜是微生物检验中最常用的精密光学仪器。 显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜