莪术油对人乳腺癌MCF7细胞凋亡及Bcl2、Bax表达的影响.docVIP

　　莪术油对人乳腺癌MCF7细胞凋亡及Bcl2、Bax表达的影响 【关键词】 乳腺癌 莪术油 MCF7细胞 Bcl2 Bax 　Abstract Objective:To investigate the effects of Zedoray Turmeric Oil on inducing apoptosis of MCF7 cells and to explore the possible mechanism of its action.Methods:Different concentrations of Zedoray Turmeric Oil of MCF7 cells.Proliferation and apoptosis of MCF7 cells munocytochemistry,and floetry quantitative analysis.The expression of Bcl2 and Bax protein ined by qualitative analysis.Results:Proliferation of MCF7 cells eric Oil.The rate of apoptosis increased as the increase in the concentration of Zedoray Turmeric Oil.The expression of Bcl2 ental groups,eric Oil can effectively inhibit proliferation of and promote apoptosis of MCF7 cells; the mechanism may be correlated to the up regulation of Bax and doeric Oil MCF7 Bcl2 Bax 　　莪术是我国传统中药之一， 是姜科草本植物莪术、 郁金的根茎， 味辛、 苦， 性温， 归肝、 脾经， 具有行气破血、 消积止痛的功效。 莪术油(zedoary turmeric oil)是莪术中提取的挥发油， 含有多种抗肿瘤有效成分。 对多种实体肿瘤(如子宫内膜癌、 宫颈癌、 白血病、 肺癌、 肝癌、 结肠癌、 乳腺癌等)有较强的抑制作用[1]， 而且具有抗血栓、 抗病毒、 抗菌和增强免疫等功能[24]。 张瑾峰等[5]发现， 莪术与三棱联合应用具有诱导乳腺癌细胞凋亡的作用。 本研究通过一定浓度的莪术油作用乳腺癌细胞系MCF7后， 观察其对MCF7细胞的凋亡诱导效应， 并通过对与凋亡相关的Bcl2和Bax蛋白表达变化的检测， 探讨莪术油对MCF7细胞凋亡诱导的作用机制。 　 　材料与方法 　　1.1 材料及仪器 　　人乳腺癌MCF7细胞株(厦门大学生命 科学 学院提供)。莪术油注射液(徐州莱恩药业有限公司，国药准字：，配制为20g/L的无菌溶液备用。RPMI 1640、二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝(MTT)(北京中杉金桥生物技术有限公司)。鼠抗人Bcl2、Bax单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)。流式细胞仪(美国GENE公司)。实验时选用对数生长期细胞。 　　1.2 MTT法生长曲线测定 　　取对数生长期的MCF7细胞，消化后制成细胞悬液，调整细胞浓度为1×104 个/ml， 接种于96孔培养板上，每孔加200μl细胞悬液，培养24小时后，加入不同浓度的莪术油(0.15、0.25、0.35、0.50、1.0mg/ml)，另设对照组(不加莪术油)和空白对照组(只加培养基)，每组设 7个复孔，分别于加药后1、2、3、4、5、6、7、8和9天时加MTT(5mg/ml)20μl，孵育4小时后，加入二甲基亚砜200μl，避光振荡10min，酶标仪在570nm处测定各孔吸光度(OD)值，取平均值，以时间为横坐标，OD值为纵坐标，绘制细胞生长曲线。 　　1.3 流式细胞仪检测凋亡 　　不同浓度的莪术油(0.15、0.25、0.35、0.50、1.0mg/ml)分别作用于贴壁生长的MCF7细胞72小时后，胰酶消化，吹打脱落，使细胞分散良好，1500r/min离心5min，弃上清，加 1×缓冲液200μl。各管中分别加入AnexinV 4μl和PI 5μl，用1×缓冲液将终体积配成250μl， 冰浴，上机检查。以不加莪术油培养72小时的MCF7细胞作为阴性对照。 　　1.4 免疫细胞化学染色 　　将对数生长期的MCF7细胞6瓶(细胞数gt;1×105/瓶)随机分为对照组和实验组， 每组3瓶。实验组用含0.35mg/ml莪术油的培养