产凝集素乳杆菌筛选及PCR-16SrDNA鉴定.docVIP

产凝集素乳杆菌筛选及PCR-16SrDNA鉴定摘要：目的从泡菜汁中分离产凝集素乳杆菌并鉴定。方法通过凝集实验筛选产凝集素的乳杆菌，用聚合酶链式反应（PCR）扩增16S rDNA可变区基因鉴定产凝集素乳杆菌。结果此菌株呈革兰阳性，短杆状，产乳酸。通过同源性比较，此菌株与Lactobacillus plantarum strain p215的同源性为99 %。结论分离得到了产凝集素的菌株，鉴定表明此菌株为植物乳杆菌。 关键词：泡菜；乳杆菌；分离；鉴定；凝集活性；DNA；核糖体；序列分析 中图分类号：Q513+.2文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)09-0009-03 Screening of Lectin-producing Lactobacillus and Identification of its 16S rDNA Gene XU Jin1, ZHAO Sheng-lan2, CHEN Chao-yin1* (1. Institute of Bioresource RD of Kunming University of Science and Technology-Tsinghua University, Kunming 650224, China; 2. Department of Applied Pharmacy, Yunnan Institute of Traditional Chinese Medicine, Kunming 650220, China) Abstract：Objective To isolate and identify lectin-producing lactobacillus from sauerkraut juice. Methods The lectin-producing lactobacillus was isolated by hemagglutination assay and identified by polymerase chain reaction (PCR) amplification of variable regions of the 16S rDNA gene. Results This strain was gram-positive, short bacilliform and lactic acid-producing. The homology to Lactobacillus plantarum strain p215 was 99 %. Conclusion The lectin-producing lactobacillus is obtained and identified as Lactobacillus plantarum. Key words：sauerkraut; lactobacillus; isolation; identification; agglutinating activity; DNA; ribosome; sequence analysis 凝集素是一类由动植物细胞分泌的糖蛋白，在细胞识别及黏着反应中起重要作用。近年，凝集素的研究取得了重大进展，其家族成员不断增加，同时发现了凝集素的更多功能，如促有丝分裂，细胞识别，病毒的毒力决定子，凝集恶性细胞、精子、骨髓细胞等。由于凝集素具有高度的糖结合专一性，已成为研究生物学和临床学非常有用的工具，用于分离纯化和确定糖复合体、细胞分裂、鉴定微生物、肿瘤诊断、治疗及预防骨髓移植等[1，2]。研究还表明，某些凝集素具有抗HIV活性[3，4]。鉴于目前还未见植物乳杆菌产凝集素抗HIV的报道，因此我们以泡菜为研究对象，分离鉴定乳杆菌及筛选出产凝集素的乳杆菌，对深入研究凝集素的抗HIV功能具有重要意义。 目前，微生物可以通过基因的相似性分类，从而反映其在进化过程中的地位。在生物进化的漫长过程中，rRNA/rDNA分子保持相对恒定的生物学功能和保守的碱基排列顺序，在结构上可分为保守区（conserved domain）和可变区（variable domain）。l6S rRNA/rDNA序列分析方法就是利用16S rRNA/rDNA保守区序列特别保守的特点，设计引物扩增16S rRNA/rDNA片段，利用可变区序列的差异对不同菌属、菌种的细菌进行分类鉴定[5]。 1材料与方法 1.1材料 泡菜样品（市售）；MRS培养基（参照文献[6]配制）。 1.2乳杆菌的分离鉴定 1.2.1泡菜汁样品中乳杆菌的分离过滤市售泡菜汁样品，将滤液稀释为100，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10