β3-肾上腺素能受体及UCP2基因多态性及儿童单纯性肥胖关系.docVIP

β3-肾上腺素能受体及UCP2基因多态性及儿童单纯性肥胖关系【摘要】 目的 研究β3-肾上腺素能受体基因的Trp64Arg变异与UCP2基因Ala55Val变异对儿童单纯性肥胖的影响是否存在交互作用，为儿童单纯性肥胖的防治提供理论依据。方法用聚合酶链反应―限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）检测UCP2基因Ala55Val及β3-AR基因Trp64Arg的多态性，比较病例组与对照组各基因型的发生频率以及不同基因型之间BMI、血液生化指标的差异。结果 β3-AR的变异频率在单纯性肥胖组和对照组差异有统计学意义（P=0.038），UCP2基因的变异频率在2组之间差异也有统计学意义（P=0.045）。当只有单一的UCP2或β3-AR变异基因型时,病例组与对照组的频率分布差异无统计学意义；但当UCP2 和β3-AR基因同时发生变异时,病例组的变异基因频率明显高于正常组(OR=4.002，95%可信区间为1.636～9.884)。结论 UCP2基因Ala55Val变异与β3-AR基因Trp64Arg变异同时发生时，会明显增加儿童单纯性肥胖症发生的危险性。 【关键词】 受体，肾上腺素能β3；多态性，单核苷酸；肥胖症；儿童 【中图分类号】 R 179 R 589.2 Q 754 【文献标识码】 A 【文章编号】 1000-9817(2007)03-0249-04 根据国际肥胖专家工作组(International Obesity Task Force,IOTF) 提供的数据以及世界卫生组织(WHO)的疾病负担报告,目前全球儿童超重率接近10%,肥胖率为2%～3%［1］。儿童肥胖与肥胖易感环境（膳食能量过多、体力活动不足、生活方式由“动”趋“静”、群众营养健康知识缺乏、各种不良社会因素等）有一定关联［2］；但有的儿童运动并不少,饮食并不多,却也发生了肥胖。这种现象不能完全以环境因素来解释,可能与遗传有一定联系［3］。 人类β3-AR的受体基因位于第8号染色体上（8p11-12），包括2个外显子，1个内含子，β3-AR在棕色脂肪组织的生热作用和白色脂肪的脂解作用中起重要的作用［4-5］。UCP2定位于人类11号染色体(11q13)，包含8个外显子，位于线粒体内膜的UCP2具有“质子漏”即驱散H+梯度的功能,能够驱散在线粒体呼吸时形成的H+梯度,使氧化过程与磷酸化过程“解偶联”，ATP生成减少［6］，主要参与脂肪和能量代谢的组织中表达。笔者用PCR-RFLP检测UCP2基因Ala55Val及β3-AR基因Trp64Arg的多态性，从而探讨UCP2基因Ala55Val变异及β?3-AR基因Trp64Arg变异与儿童单纯性肥胖的关系。 1 对象与方法 1.1 对象 1.1.1 筛查标准 2～6岁儿童参照WHO儿童肥胖诊断标准，以体重超过同年龄、同性别身高标准体重的10％为超重，超过20％为肥胖。肥胖分度：以超过同年龄、同性别身高标准体重的20%～29％为轻度，30%～49％为中度，≥50％为重度肥胖［7-8］。7～12岁儿童利用身高、体重测量值计算BMI指数后，按照国际生命科学学会中国肥胖工作组（WGOC）2003年11月颁布的“中国儿童青少年超重、肥胖体重指数筛查分类标准”进行判断［9］。 1.1.2 病例组与对照组的选择 排除病理性及药物性肥胖，按上述标准从2 641名2～12岁儿童中筛查出单纯性肥胖173例，从中随机选择100例作为病例组（男55例，女45例），并按照与病例同年龄（±6个月）、同性别、同身高（±3 cm）、体重正常的标准选择100例健康儿童作为对照，以求与肥胖儿童生长发育水平一致。 1.2 方法 1.2.1 目的基因的检测 采用常规酚/氯仿抽提外周血基因组DNA，用聚合酶链反应―限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）检测UCP2基因Ala55Val及β?3-AR基因Trp64Arg的多态性。（1）β?3-AR基因Trp64Arg的多态性检测：引物设计参照相关报道［10］的序列。上游引物：CGCCCAATACCGCCAACAC，下游引物：CCACCAGGAGTCCCATCACC。反应体系：以1 μL DNA为模板在总反应体积20 μL内行PCR扩增，扩增产物为210 bp，用2％琼脂糖凝胶90 V电泳30 min。PCR反应条件为：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，68 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共35个循环，最后72 ℃进一步延伸10 min。在10 μL酶切体系中限制性内切酶BstNI(MvaI)［酶切位点CC↓(A/T)GG］0.5 μL酶解PCR产物5 μL，在37 ℃水浴过夜。用3％琼脂糖凝胶电泳，120 V，50 mi