urvivin在胆囊癌中表达及临床意义.docVIP

urvivin在胆囊癌中表达及临床意义关键词 Survivin 胆囊癌 免疫组织化学 Survivin是新近克隆出的一种结构独特的哺乳类凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员之一,是一种新发现的凋亡抑制基因,表达于人胚胎发育组织和人类大多数肿瘤组织中,但不表达于人终末分化的组织(胸腺除外)#65377; 资料与方法 标本来源:收集我院肝胆外科1998年1月～2004年1月手术切除胆囊癌标本38例,其中男14例,女24例,年龄34～84岁,平均年龄60.7岁#65377;所有患者术前均未经过放疗#65380;化疗及免疫治疗等任何抗肿瘤治疗#65377;所有病例均为胆囊癌根治切除术后的标本,同时选取因结石性慢性胆囊炎而行手术切除的15例非癌胆囊组织标本作为对照#65377;将所有石蜡包埋组织制成厚约4μm的连续切片,HE染色后,进一步核实诊断,并去除有分歧病例#65377; 主要试剂:Survivin(FL-142)兔抗人多克隆抗体浓缩液,美国Santa Cruz公司产品#65377;PV-9000免疫组化检测试剂盒#65380;浓缩型二甲苯联苯胺(DAB)试剂盒,美国ZYMED公司产品#65377;以上试剂均由北京中山生物技术有限公司提供#65377;Survivin稀释度为1∶100#65377; 检测方法:用免疫组织化学染色(PV-9000通用型二步法)#65377;用已知阳性肝癌切片作为阳性对照,用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照#65377;染色步骤为:①石蜡切片脱蜡至水洗#65377;②3%H?2O?2室温孵育15分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性#65377;③蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟#65377;④ 抗原热修复:将切片放入盛有枸橼酸缓冲液的广口烧瓶中,置微波炉内加热,从小广口瓶的温度达到92～98℃起计时持续15分钟,取出容器,室温冷却30分钟(不可将切片从缓冲液中取出冷却)#65377;蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟#65377;⑤滴加稀释的一抗(一抗工作液1:100),置湿盒内4℃过夜#65377;⑥PBS冲洗,2分钟×3次#65377;⑦ 滴加试剂1(Polymer Helper),湿盒内37℃温箱孵育20分钟,PBS冲洗,2分钟×3次#65377;⑧ 滴加试剂2(poly peroxidase-anti-rabbit IgG), 湿盒内37℃孵育20分钟,PBS冲洗,2分钟×3次#65377;⑨显色剂显色(DAB)#65377;滴加新鲜配置的DAB显色剂,显微镜下控制显色1～4分钟,自来水冲洗,终止显色#65377;⑩复染#65377;苏木素复染2分钟,1%盐酸乙醇分化,水洗显蓝#65377;B11上行梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片#65377; 免疫染色结果判断标准:先在低倍镜下选癌巢,然后选5个高倍镜视野计数#65377;5%以上癌细胞核或胞质中出现棕黄色或深棕色颗粒为Survivin染色阳性#65377; 统计分析:应用X2检验及四格表确切概率法#65377;上机用SPSS 11.0软件完成统计学处理#65377; 结 果 Survivin阳性染色在胆囊癌细胞浆#65380;胞核中均可见到#65377;经检测胆囊癌组织中Survivin蛋白表达阳性,结石性慢性胆囊炎组织中未见Survivin蛋白表达,Survivin在胆囊癌组织中阳性表达率为71.1%(27/38)#65377;由此可见两者差别非常有显著性(P0.05)#65377; 讨 论 本研究结果显示: Survivin基因的表达与患者的年龄#65380;性别#65380;肿瘤的大小#65380;组织学类型及分化无关#65377;Survivin蛋白阳性表达率在淋巴结转移组(55.6%)明显低于无淋巴结转移组(75.9%)#65377;由此可见两组之间可以说有一个差别趋向,但两者之间的差异也无统计学意义(P0.05)#65377;这提示Survivin的抗凋亡作用在胆囊癌的转移过程中作用不大#65377;如果增加样本,可能统计学上会有差异#65377;常氏等人[1]关于Survivin在胆管癌的免疫组化研究中也得出类似结论#65377;而朱氏等人[2]关于Survivin在肝细胞癌的免疫组化研究中发现Survivin表达与肝癌的转移有关#65377;我们认为胆囊癌中Survivin蛋白的表达与淋巴结转移无关,有无关系还需要进一步的研究 #65377; 多项研究结果表明Survivin参与多种肿瘤的发生#65380;发展,与肿瘤的预后不良#65380;复发密切相关,是一个具有潜在价值的肿瘤标志物,可能作为评价康复治疗的有效指标之一#65377;尽管Surviv