沉默c2orf68基因对结直肠癌细胞增殖的影响-生物通.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（２）：７１３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 沉默ｃ２ｏｒｆ６８基因对结直肠癌细胞增殖的影响 蒋婷婷　温晓霞　陈　尧 （四川大学基础医学与法医学院　成都　６１００４１） 摘要　目的：通过ＲＮＡ干扰技术抑制人结直肠癌 ＳＷ４８０、ＳＷ６２０及 ＬＳ１７４Ｔ细胞株中ｃ２ｏｒｆ６８基 因的表达，进一步观察其生物学特性的改变，以阐明ｃ２ｏｒｆ６８基因对结直肠癌细胞增殖的影响。方 法：利用ｓｉＲＮＡ在线设计软件设计合成干扰片段，并将２个干扰片段转入所试细胞株中。应用 ＲＴＰＣＲ法检测细胞ｍＲＮＡ的表达；利用ＭＴＴ实验观察细胞增殖情况；应用流式细胞技术检测细 胞凋亡。结果：转染ｓｉＲＮＡ片段后，ＳＷ４８０、ＳＷ６２０及 ＬＳ１７４Ｔ细胞株的ｍＲＮＡ表达都下降，其抑 制率分别为：５０．０５％、４４．７９％；４９．６９％、３０．００％；５０．１５％、４５．７９％。随后，选取干扰效率高的 ｓｉＲＮＡ１干扰片段做后续实验。ＭＴＴ实验发现，ｓｉＲＮＡ转染ＬＳ１７４Ｔ细胞后，细胞的增殖能力明显 下降，细胞的增殖抑制率为２１．２％（Ｐ＜０．０５）。同时，采用流式细胞仪检测细胞的凋亡，实验表 明，实验组细胞凋亡率为１８．１３％（Ｐ＜０．０５）。结论：成功筛选了抑制结直肠癌ｃ２ｏｒｆ６８基因的特 异性干扰片段，该片段可以下调人结直肠癌细胞株中ｃ２ｏｒｆ６８的ｍＲＮＡ，抑制人结直肠癌细胞的生 长，促进细胞凋亡，说明该基因可能与结直肠癌的细胞增殖有关，进一步调控相应生物学特性的 改变，引起结直肠癌的发生。 关键词　ｃ２ｏｒｆ６８基因　ＲＮＡｉ　结直肠癌 中图分类号　Ｑ７８９ 　　结直肠癌是人类较为常见的恶性肿瘤之一，其发 ＲＮＡ），从而诱导内源靶基因的ｍＲＮＡ降解，达到阻止 生、发展是一个多基因、多阶段致癌的复杂过程，包括 ［７８］ 基因表达的目的 。ＲＮＡｉ技术具有高度的特异性、 癌基因的激活、抑癌基因的失活或缺失、错配修复基因 沉默效率高、转化效率高、副反应小，在有效沉默靶基 的突变等。最近几年调查显示，结直肠癌的发病居消 ［９］ 因的同时，对细胞本身的调控系统也没有影响 ，该技 化道恶性肿瘤的第二位，在我国发病率较高，而且呈现 术广泛应用于功能基因组的研究领域。因此，本实验 ［１２］ 逐年增高的趋势 。在实验前期工作中，通过抑制性 通过ｓｉＲＮＡ来抑制ｃ２ｏｒｆ６８基因的表达，采用实时荧光 消减杂交技术和基因芯片技术筛选出与结直肠癌发病 定量ＰＣＲ检测ｃ２ｏｒｆ６８ｍＲＮＡ表达，观察沉默ｃ２ｏｒｆ６８基 相关新的表达序列标签ＥＳ２７４０８１（ＧｅｎｅＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎ 因后，结直肠癌 ＬＳ１７４Ｔ细胞株的生物学特征变化，从 ［３４］ Ｎｕｍｂｅｒ：ＮＭ＿００１０１３６４９．３；ｇｅｎｅｎａｍｅ，ｃ２ｏｒｆ６８） 。通 而研究该基因对结直肠癌细胞增殖的影响。 过Ｂｌａｓｔｎ比对发现其对应的全长序列为ｃ２ｏｒｆ６８基因。 １　材料与方法 通过生物信息学技术及实时荧光定量 ＰＣＲ的实验显 ［５６］ １．１　材　料 示，该基因可能与结直肠癌发病有关 。 　　ＲＮＡｉ（ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，即ＲＮＡ干涉）是指通过反 　　结肠癌细胞株 ＳＷ４８０细胞株、ＳＷ６２０细胞株及 义ＲＮＡ与正链ＲＮＡ形成双链ＲＮＡ特异性地抑制靶基