用hplc-ms-ms法多残留分析蜂蜜中的杀虫剂和抗生素.docVIP

用HPLC-MS-MS法多残留分析蜂蜜中的杀虫剂和抗生素 摘要：本实验的目的是建立一种检测蜂蜜中两类抗生素和三种杀虫剂残留的分析方法。分析物为5种四环素、4种磺酰胺、杀虫剂蝇毒磷、多菌灵和阿米曲士（两种代谢物）混合物。所有的化合物都从蜂蜜中提取，用固相萃取（SPE）预浓缩。采用高效液相色谱-质谱-质谱（HPLC-MS-MS）方法，用三级四极杆串联质谱仪的多重反应监测(MRM)的模式,达到识别并量化以上化合物（Sheth et al J Agric Food Chem 38:1125–1130, 1990）。在分析过程中发现取决于蜂蜜来源的植器官的强矩阵效应。这就导致乐需要一个标准的方法定量检测到的污染物。 关键词：蜂蜜 抗生素 杀虫剂 多残留 HPLC-MS-MS 固相萃取 引言 蜂蜜是一种混合物，长期被视为自然健康食物，也就是说，不含任何污染物[1]。然而养蜂人必须克服两大威胁—传染病和杀虫剂对蜜蜂的毒害。因此必须要能够发现蜂巢产物（包括蜂蜜、蜡、蜂胶等等）中可能存在的不良的残留物[2]。 蜂蜜中含有的微量的物质有可能是被授权或者禁止的，比如环境中的杀虫剂。本研究的目的是建立一种可以同时检测出蜂蜜中抗生素和杀虫剂多残留的方法。 检测两类抗生素,四环素和硫酰胺,因为这些抗生素常被养蜂人用于治疗污仔病（一种蜜蜂幼虫疾病）[2]。我们还需要检测一些杀虫剂、阿米曲士和蝇毒磷[3],它们被用于治疗蜂螨,还有被广泛用作杀真菌剂的多菌灵[5],特别是用在作为最频繁的蜂蜜来源之一的油菜(油菜籽)上。 四环素是人类和动物经常使用的有效抗生素药物。这类抗生素在各种各样的食物中存在,如牛奶[6、7],蛋[8],牛肉[9、10]。同样的,磺酰胺是对人类相对来说无毒的抗感染药物,。目前为止蜂蜜中还有数量最多的磺酰胺尚未被欧盟[11]授权。 　　最早在养蜂中使用杀虫剂、阿米曲士是在20世纪80年代初期法国用于治疗蜂螨。现有的文献中几乎没有报道关于蜂蜜中阿米曲士的存在,但Jimenez报道过其分解产物的存在[12]。他发现了5种，其中只有两中在两周后仍在存在于大多数样品中。蝇毒磷是一种有机磷酸酯用作杀虫剂或杀螨剂治疗蜂螨和小蜂窝甲虫。在2002年,美国环境保护署(EPA)建立一个上限，蜂蜜中0.1mg/kg和蜂蜡中100mg/kg。欧盟的标准为蜂蜜中0.1mg/kg[13]。这两种产品是用于对抗蜂房寄生虫。而多菌灵则是用于治疗作物、果树和蔬菜的杀真菌剂。我们选择这种杀真菌剂是有很多原因的。很多蜜蜂采集蜂蜜的作物（油菜、向日葵)上使用它。另外,分析多菌灵也是分析另一种杀真菌剂,苯菌灵的检测形式与多菌灵相同[14]。 很难在一些基质(水、肉、牛奶、蜂蜜等)中检测四环素、磺酰胺或杀虫剂残留,因为低浓度限制了检测和量化。表1所示，从浓度和检测限来看数据既不一致也不满意。现在的工作是为了建立多残留方法。 2.实验部分 .试剂 我们分析九种抗生素和三种杀虫剂(图1)。四环素类抗生素(四环素(TC),氧四环素(OTC)、强力霉素(DC)、地美环素(DMC)和氯四环素(CMC))和磺酰胺类抗生素（磺胺塞唑唑唑Sigma-Aldrich (St Quentin Fallavier, 法国)。四环素是盐酸盐。 三种杀虫剂为，阿米曲士(AMZ),蝇毒磷(CMP)和多菌灵(CDZ)来自Cil-Cluzeau(法国，巴黎)。阿米曲士两个主要的分解产物为2、4-二甲基苯(amitrazⅠ)、N -(2、4 -二甲基苯)甲酰胺(amitraz II) (图2)。 蜂蜜样品为法国蜂蜜来自未经处理的蜂巢，并不同的植物器官为蜜源。他们由不同的养蜂人提供，使用前确认了这个化合物在该研究中无法被HPLC-MS-MS检测到。 溶液是由各化合物溶于甲醇中，浓度为1g/L，并保存在- 16℃。标准溶液是按照90:10(v / v)水-乙腈稀释溶液，然后保存在黑暗的4℃冰箱中最多一个星期。 甲醇、乙腈和二氯甲烷均为色谱纯，来自Fisher Scientific (Illirch, France)甲酸，纯度为98-100%来自Riedel-de Ha?n (St Quentin Fallavier, France)。氨气(20%)、盐酸(37%)和柠檬酸来自Prolabo，RP Normapur（Pessac，法国)。 固相萃取柱来自Water (St Quentin en Yvelines, France)。 仪器 使用Alliance 2695色谱仪(Waters, St Quentin en Yvelines,法国),色谱柱为Inertsil ODS2 (Hichrom，Reading，UK)， Quattro-Micro三级四极杆质谱仪(Micromass-Waters)。色谱仪配有独立