不同色谱条件对苯甲酸钠山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响.docVIP

不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响 摘要：目的：采用RP-HPLC法C-18柱；流动相：0.02mol/L乙酸铵∶甲醇（比例分别采用82∶18、85∶1588∶12）0.8、1.01.2 mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。检测波长：254nm、230 nm液相色谱分析实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化RP-HPLC法Shimadzu高效液相色谱仪（SPD-10A VP紫外-可见检测器、LC-6A高压泵、CTO-10AS VP柱温箱〈含7725i型手动进样器〉），浙大智达N2000工作站；Sartorius CP225D型电子天平；Millipore Milli-Q型纯水仪；Sartorius BP-20型pH计。 1.2试剂：甲醇为色谱纯；苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠对照品（Dr. Ehrenstorfer公司提供）；其余试剂均为分析纯。 2 材料与方法： 2.1 色谱条件 色谱柱：C-18柱；流动相：0.02mol/L∶甲醇（比例分别采用82∶18、85∶15以及88∶12）；流速：采用0.8、1.01.2 mL/min，柱温：30℃；进样量：10μL检测波长：254nm、230 nm。3 结果与分析 3.1 不同波长对分离的影响 3.1.1波长对半峰宽、保留值、理论塔板数、分离度的影响 由表一可看出，在检测波长分别为230nm和245nm，流速为1.0ml/min，流动相0.02mol/L乙酸铵∶甲醇比例为82:18、85：15、88：12时，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的半峰宽、保留值、理论塔板数以及分离度的变化不大，说明波长对苯甲酸、山梨酸、糖精钠的半峰宽、保留值、理论塔板数以及分离度影响不大。 3.1.2波长对峰面积的影响 由表一看出，不同流动相下，在波长为230nm时苯甲酸、山梨酸、糖精钠的峰面积比在254nm时的峰面积要大许多，表明波长对峰面积影响显著。同一种物质对不同波长光的吸光度不同，在波长为230nm时苯甲酸、山梨酸、糖精钠吸光度大于在254nm时的吸光度。 表一：不同波长对分离的影 流动相比例 波长 (nm) 半峰宽 保留值 理论塔板数 分离度 平均峰面积 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 苯甲酸 糖精钠 山梨酸 R1 R2 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 82:18 254 0.107 0.138 0.098 2.612 3.206 3.013 3301 5237 2990 2.3 0.96 404006 885600 354049 230 0.106 0.131 0.097 2.607 3.163 3.061 3351 5517 3230 2.6 0.53 3721749 435656 2408864 85:15 254 0.092 0.096 0.099 2.777 3.089 3.434 5048 5736 6666 2 2.1 416059 915127 372397 230 0.092 0.095 0.1 2.772 3.082 3.421 5029 5831 6484 1.95 2 3806739 459759 2408277 88:12 254 0.098 0.098 0.098 3.087 3.529 4.038 5497 7184 7603 2.7 2.9 405044 899624 359094 230 0.093 0.1 0.106 3.18 3.623 1.172 6477 7272 8582 2.7 3.2 845622 138164 527348 3.2 流速对分离的影响 3.2.1流速对半峰宽、保留值、理论塔板数的影响 由表二可看出，在三个比例不同的流动相下，流速分别为流速1：2：3：3.2.2流速对分离度的影响 由表二可知，流速对分离度影响不大。无论流速怎样改变，在流动相比例为82：181.5，1.5，分离较好。 表二 流速对分离的影响 检测波长：254nm 流速 ml/min 半峰宽W1/2 保留值tR 理论塔板数n 分离度R 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 R1 R2 82:18 0.8 0.127 0.174 0.119 3.249 3.982 3.744 3626 2901 5484 2.4 0.95 1.0 0.107 0.138 0.098 2.612 3.206 3.013 3301 2990 5237 2.3 0.96 1.2 0.093 0.123 0.093 2.188 2.678 2.52 3067 2626 4068 2.1 0.