实时定量RTPCR检测急性早幼粒细胞白血病PMLRARa融合基因.docxVIP

实时定量RTPCR检测急性早幼粒细胞白血病PMLRARa融合基因--------------------------------------------------------------------------------核心提示:【摘要】nbsp;nbsp;本研究旨在建立用实时定量RTPCR检测急性早幼粒细胞白血病（APL）PMLRARanbsp;mRNA的方法，探讨APLnbsp;PMLRARa融合基因表达水平与疗效的关系。用RTPCR扩增培养的NB4细胞的PMLRARa融合基因，取1μgnbsp;NB4细胞的总cDNA进行10倍的　　作者：段连宁郎丽李惠民刘华王义民张学美【摘要】本研究旨在建立用实时定量RTPCR检测急性早幼粒细胞白血病（APL）PMLRARa mRNA的方法，探讨APL PMLRARa融合基因表达水平与疗效的关系。用RTPCR扩增培养的NB4细胞的PMLRARa融合基因，取1μg NB4细胞的总cDNA进行10倍的梯度稀释，作为标准品，建立荧光定量RTPCR方法，对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行了测定。定量检测4例急性早幼粒细胞白血病（APL）患者治疗前后骨髓内PMLRARa融合基因转录本水平，并对1例经治疗完全缓解后又复发的患者PMLRARa转录本水平（拷贝数）进行动态监测。结果表明：用本研究建立的实时定量RTPCR方法可检测出10-5 μg NB4细胞cDNA中的PMLRARa融合基因，其重复性的CT值，管间、批间变异系数（CV）分别为2.1%、3.8%。4例患者初治骨髓PMLRARa基因转录本水平的分别为1 884、5 533、1 803、4 677拷贝，平均为3 475拷贝。经ATRA+化疗治疗后其PMLRARa基因转录水平下降至40、135、79、229拷贝，平均为121拷贝。还有1例患者治疗前PMLRARa基因转录本水平为8 600拷贝，经过4个月治疗，虽然此时患者处于完全缓解期，但其转录水平拷贝数仍有730。3个月后患者出现复发，转录本水平升至为11 000拷贝。经过ATRA+化疗治疗后转录本水平又逐渐下降至1 200拷贝。结论；建立的实时定量RTPCR灵敏、重复性好。治疗后APL患者的PMLRARa融合基因转录本水平明显下降，复发时基因转录本水平又升高。融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系一致，这有助于监测白血病微小残留病，评价疗效及判断预后。【关键词】急性早幼粒细胞白血病 Detection of PML/RARa Transcripts in Acute Promyelocytic Leukemia by Realtime Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction Abstract Tihs study was purposed to establish a realtime quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) for detection of PML/RARa fusion gene in patients with acute promyelocytic leukemia (APL) and to explore the relationship between the expression level of PML/RARa fusion gene transcript and the clinical status or efficacy of the therapy in APL. The conventional RTPCR was used to amplify PML/RARa gene from cultured NB4 cells. Standard curves were constructed by modified realtime PCR on standard template after 10fold serial dilutions of cDNA of 1 μg NB4 cells. The sensitivity, stability and repeatability of this method was determined. The PML/RARa gene transcripts of bone marrows in 4 APL patients before and after treatment and in 1 APL patient relapsed after complete remis