MGMT在脑胶质瘤中表达及其意义.docVIP

MGMT在脑胶质瘤中表达及其意义摘　要：目的：探讨人脑胶质瘤化疗耐药基因MGMT的表达与不同级别脑胶质瘤的关系，为胶质瘤的个性化化疗提供部分依据。方法：将63例脑胶质瘤标本分为4组，经免疫组化染色后，观察MGMT的表达部位和程度。结果：MGMT在脑胶质瘤中的表达呈棕色粗大颗粒，定位于胞质或胞核内，阳性细胞散在或局灶性分布，染色强度及分布无明显规律。不同级别胶质瘤的MGMT阳性表达率无显著性差异(P0.05)。结论：MGMT的表达与脑胶质瘤的病理分级无明显相关性，测定MGMT的表达水平可为胶质瘤的临床个性化化疗提供部分参考依据。 关键词：MGMT　耐药　脑胶质瘤 中图分类号：R739.41　　　　文献标识码：A　　　　　文章编号：1007-3973（2012）005-112-02 脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤，占颅内肿瘤的40%以上，年发病率约为十万分之五。目前临床常规治疗是以手术切除为主，术后联合放疗和化疗等综合治疗。术后化疗可以部分杀灭或抑制残存的肿瘤细胞，是胶质瘤综合治疗措施中的重要步骤之一，而影响化疗效果的重要因素之一就是肿瘤细胞对化疗药物的敏感性及耐药性如何。相关研究表明，决定DNA修复酶-O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase, MGMT) 表达量的主要因素就是MGMT基因启动子的甲基化状态，而MGMT在胶质瘤组织中的表达与肿瘤细胞的耐药性相关，有可能影响到患者的化疗效果及预后。 本研究通过测定胶质瘤组织中MGMT的表达水平，拟预先评估患者对烷化剂等化疗药物的耐药性，对于指导临床个性化化疗，提高疗效等方面有着重要意义。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 纳入标准 收集昆明医学院第三附属医院神经外科2009年1月至2011年10月手术切除的63例经病理学诊断为胶质瘤的肿瘤标本组织。所有患者术前未行放化疗及患有其他肿瘤。 1.1.2 病例特点 患者年龄14岁～75岁，平均41.2岁，其中男性33例，女性30例；按照WHO关于中枢神经系统肿瘤分类法，将63例脑胶质瘤分为4组：Ⅰ级组7 例，Ⅱ级组20例，Ⅲ级组19例，Ⅳ级组17例。各组别患者年龄及性别构成无统计学差异。 1.1.3 标本处理 所有肿瘤组织标本均尽快送至病理科，经中性福尔马林液固定16h～24h，然后石蜡包埋，4?%em厚度连续切片2张。一张切片行HE染色，作为组织学分级，一张切片行免疫组织化学染色。 1.2 方法 1.2.1 主要试剂 浓缩型鼠抗人MGMT单克隆抗体、通用型SP广谱试剂盒、DAB显色剂均购自北京中山金桥生物公司。按照试剂盒说明书提供的实验方法进行。 1.2.2 免疫组织化学染色 石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，3%过氧化氢甲醇溶液，室温下孵育20分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗后，在室温下抗原修复；滴加鼠抗人MGMT单克隆抗体，孵育60min(37℃)；生物素标记的第二抗体，室温孵育10min；链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温孵育10min；DAB 显色；显微镜下观察显色情况，显色适度后自来水冲洗中止反应，然后脱水、透明、封固，光镜下观察并摄片。 1.2.3 评价标准 MGMT阳性表达定位于胞质或者胞核，染色阳性细胞为肿瘤细胞核或细胞浆着色，呈棕黄色颗粒，着色深者为棕褐色颗粒。在高倍镜(40??0)下有3个以上细胞浆或细胞核棕染并且明显高于背景者判定为阳性(+)，否则判定为阴性(-)。其中（+）及（++）者界定为阳性；（-）及可疑阳性者界定为阴性。所有检测结果在双盲情况下由研究人员及专业人员分别阅片评估。 1.2.4 统计学方法 采用SPSS12.0统计分析软件进行统计学处理。计数资料采用?%p2检验，以P=0.05为显著性标准。 2 结果 2.1 MGMT在脑胶质瘤中的表达 MGMT表达阳性的细胞为染色呈棕色，位于胞质或胞核内，阳性细胞散在或局灶性分布；通过光镜下观察，在同一肿瘤组织切片中，阳性细胞的染色强度及分布呈不均一性，无明显规律。本组63例脑胶质瘤组织MGMT的阳性表达率为50.8%。 2.2 MGMT在不同病理级别胶质瘤中的表达 MGMT的阳性表达率在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级别组间的比较无显著性差异（P0.05）；MGMT的阳性表达率在低级别组（Ⅰ级+Ⅱ级）和高级别组（Ⅲ级+Ⅳ级）间的比较无显著性差异（P0.05）。 3 讨论 脑胶质瘤的临床常规治疗是以手术切除为主，术后联合放疗和化疗等综合治疗。长期以来，由于缺乏有效的化疗药物，化疗的地位不被足够重视。直到近期，Meta分析的结果及EORTC/NCIC前瞻性