小鼠尾静脉病毒、腺病毒、慢病毒注射操作步骤.pdfVIP

小鼠尾静脉病毒(腺病毒、慢病毒)注射操作步骤 小鼠尾静脉病毒(腺病毒、慢病毒)注射操作步 骤1、固定 建议自制了一个小圆筒，筒的直径正好容下 一直小鼠，筒的一端是盲端，筒身上开了N 个 通气空，有一个后盖，后盖上留有一圆孔，正好 容下尾巴。由于小鼠有钻洞的习性，把它往筒口 一放，自己就钻进去了，然后把尾巴从盖孔中穿过，盖上后盖即可。 找一张桌子，把尾巴压在桌边沿上，由于边沿是个直角，把尾巴的下 1/3处压在直角上能使尾部暴露很好。 2、扩张血管 小鼠尾静脉用热水泡一下或是用 75％的酒精擦拭小鼠尾静脉， 以使注射前使尾静脉充分充血扩张；或是在上方悬挂一灯泡，在适当 距离烤尾静脉也可以使尾静脉充血扩张。 3、注射 小鼠尾静脉共三根，一根背侧， 另两根分置于两侧，腹侧是动脉。 每只小鼠病毒注射量： 以下为建议，具体的注射量需 要实验摸索 9 纯化过腺病毒：1-5×10 毒量注射(1)，比如纯化腺病毒滴度为 1× 11 10 PFU，则每只小鼠注射体积约为10-50ul。 7 8 浓缩慢病毒：1-5×10 毒量注射，如慢病毒滴度为1×10 PFU/ml，则 小鼠理论上注射100-500ul，实际上每次注射体积有严格要求 （见下 方），所以如果量不够，需要分多次注射，每次注射至少间隔1-2天。 每只小鼠病毒注射体积： 注射体积不要超过200ul，最好控制在100ul以下，注射剂量过多， 也会发生充血性心衰。 关于注射针：一般小鼠尾静脉注射可采用 1ml 注射器，并更换为 4 号针头。 （不要用1ml注射器配套的针头，太大了！） 建议选用胰岛素注射针 （有大小容量，见下图，有很多厂家，图为 BD 的胰岛素针），可按需选择。 尾 静 大鼠 四号针头 300ul 小鼠 四号针头 100ul 注意： 1.一开始最好从小鼠尾静脉的末端开始注射，如果在中前端注射一 旦失败这样可以防止注射的数次失败后液体漏出。 2.注射时手上的感觉很重要，如果针头进入尾静脉，手上会有一种 透空感，另外针头如果进入后，液体的推射会很顺利；如果，感觉液 体推不进去，很费力，说明针头没有进入尾静脉，而是进入了周围的 软 组织。 3.在注射时，一个很重要的原则是注射要缓慢，均匀推射，速度不 可以快，一旦速度快，小鼠会发生充血性心衰；如果一旦出现这种情 况，立即停止注射，对小鼠实行心脏按摩，也许可以救活。 4.病毒实验带有一定的危险性，为了您的安全和健康，请穿实验服并 戴一次性手套,并谨慎小心进行实验操作。 参考文献 1. Wang LJ, Wang J, Li N, et al. Molecular characterization of the NPC1L1 variants identified from cholesterol low absorbers. J Biol Chem 2011; 286(9): 7397-408