4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)检测试剂盒(香豆酸比色法).pdf

北京雷根生物技术有限公司 4-香豆酸辅酶A 连接酶(4CL)检测试剂盒(香豆酸比色法) 简介 ： 4-香豆酸辅酶 A 连接酶是催化桂皮酸形成咖啡酸、香豆酸的酶。该酶多存在于高等植 物、酵母、菌类可溶性部分物质 ，属于细胞木质素合成途径中间的关键酶 ，研究该酶可以 探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理 ，为减少水果石细胞含量提高其品质 提供依据。 Leagene4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)检测试剂盒(香豆酸比色法)检测原理是以香豆酸 作为底物 ，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法 ，于分光光 度计检测吸光度 ，以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液 或匀浆液、血清等样品中内源性的4-香豆酸辅酶 A 连接酶活性 ，尤其适用于检测水果中4- 香豆酸辅酶 A 连接酶活性。该试剂盒仅用于科研领域 ，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成 ： 编号 TE0413 Storage 名称 20T 试剂(A) 4CL Lysis buffer 125ml 4℃ 避光 试剂(B) 4CLAssay buffer 4ml 4℃ 避光 试剂(C) CoA-SH Solution 32ml -20℃ 试剂(D) 4CL终止液(备选) 1ml RT 使用说明书 1份 自备材料 ： 1、蒸馏水 2、研钵或匀浆器 3、离心管或试管 4、低温离心机 5、水浴锅或恒温箱 6、比色杯 7、分光光度计 操作步骤(仅供参考) ： 1、准备样品 ： ①植物样品 ：取植物组织或水果中层果肉 ，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆 ，加入 4CL Lysis 北京雷根生物技术有限公司 buffer继续研磨或匀浆 ，离心 ，留取上清液 ，冻存 ，用于 4-香豆酸辅酶 A 连接酶的检测。 ②血浆、血清和尿液样品 ：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定 ， 冻存 ，用于 4-香豆酸辅酶 A 连接酶的检测。 ③细胞或组织样品 ：取恰当细胞或组织裂解液 ，如果有必要需进行适当匀浆 ，离心 ，取上 清液 ，冻存 ，用于 4-香豆酸辅酶 A 连接酶的检测。 ④高活性样品 ：如果样品中含有较高活性的 4-香豆酸辅酶 A 连接酶 ，可以使用蒸馏水或 C4H Lysis buffer稀释进行恰当的稀释。 2、加样 ：按照下表设置对照管、测定管 ，取出CoA-SH Solution等试剂恢复至室温溶解 ， 溶液应按照顺序依次加入 ，并注意避免产生气泡。如果样品中的4CL活性过高 ，可以 减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管 ，求平均值。 加入物(ml) 对照管 测定管 4CL对照 0.175 － 待测样品 0.35 0.35 4CLAssay buffer － 0.175 CoA-SH Solution 1.575 1.575 3、4CL检测 ：立即以分光光度计 ，比色杯光径 1.0cm ，以对照管为对照 ，测定测定管的吸 光度(A 测定 0)。准确孵育后 ，立即加入 l4CL终止液终止反应