涂层细胞培养板相关问题.docVIP

培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。 (一)多聚赖氨酸包被： 问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子 答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。一个能最多有效过滤200ml。 铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。消毒后30分钟进入实验室。事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。具体细节就不多说了。 首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。 取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。再将水吸出来。反复三次。注意换吸管，要无菌操作的。 最后将铺好的板子放于培养箱待用。 如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。 问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：） 答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。 以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。使用时，用高纯度的蒸馏水稀释成0.11mg/ml的使用浓度，过滤除菌，以50微升每平方厘米的量均匀涂于培养底物的表面，室温下静置5min，吸除多余液体，股风吹干即可。 问：多聚赖氨酸包被培养板后看上去应该是什么样的？？ 要做原代培养，为了促进细胞贴壁，拟用PLL包被培养板。 1.我买的是博士德分装Sigma的10ml的那种，可是院子里搜了一下，有人说没有做过细胞培养试验，不确定能否用于细胞培养！！这怎么办，不能用么？ 2.我的方法是这样的，取了0。5ml，加入5毫升灭菌去离子水后，分成6份0.9ml，6孔板里放上玻片（准备以后做免疫组化直接取片子的），一个孔一份，室温5分钟后吸掉液体，超净台内吹干过夜。第二天D-Hanks液洗3遍，晾干，紫外线照一会儿再用。请问这样做有没有硬伤？？ 3.包被好后的板底及玻片应该是什么样的呢？？我发现板子干了以后，上面有些白点点，一开始以为是水滴，后来发现不是。莫非是PLL，那也是不是太夸张了？？请问这种现象正常否？？ PDL有用于组化玻片包被的不能用于细胞培养，你在用前需先确定是细胞培养级的，细胞培养板用PDL包被完后是看不出什么的，如果有颗粒是PDL在配制是未完全溶解，可看一下说明书。 我包被完用无菌水洗板子2－3次，吹干后很干净，以前用PBS洗，吹干后也发现有白点，考虑是PBS中的盐沉淀。 (二)明胶包被： 问：在细胞原代培养时，在培养瓶里铺明胶，国产的明胶也以可用吗？它是用什么配置呢？还有怎么消毒明胶呢？请多指教，谢谢！ 答：国产明胶不太好用，明胶可以用PBS溶液溶解，一般在100度煮15分钟，趁热分装，分装后放在4度，不要冰冻。 问：明胶消毒之后可以放置多长时间？还是现配现用呢？你说的分装是指直接铺在培养瓶吗？如果不是的话，放在4度冰箱不是已经固定了吗？固定之后有怎么铺在培养瓶呢？因为是没做过实验所以很不明白。 答：sigma 有现成的终浓度是2%的明胶，已消毒，买来即可使用，方便而且不贵，仅100多块钱。4度时明胶是胶冻状，室温下放置20-30分钟就可变成液态，说明书上建议使用的包被密度是5-10ug/cm2。 国产明胶就可以的，用去离子水配成1%即可。可以一次配50ml或100ml。使用时取你所需量高压灭菌即可。灭菌结束取出稍凉就可以铺在培养瓶中。 问：明胶包板完毕后，培养皿要干燥呢还是保持湿润？ 答：明胶包被培养板或培养瓶24小时后， 将明胶倒掉，用培养基冲洗，就可以接种细胞了。 问：在园里有哪些信誉好的足球投注网站了一下关于明胶在细胞培养中的使用问题，还是有很多问题大家没有详细和标准的说明，现有几个具体问题，请教各位战友， 1.明胶溶液配置的问题:用无菌PBS配还是用去离子水配?我们实验室有国产的明胶，很大一瓶的那种，能不能用于细胞培养?难道一定要用GI