色谱基本知识--薄层色谱.pptVIP

薄层色谱（Thin Chromatography） 2.4.1点样 薄层板：20cm×20cm 滤纸长度：20~25cm，宽度以样品个数决定。 溶液浓度：0.01~1% 原点直径：3~5mm 原点间距离：2~3cm 点样体积：1~5 点样量：10~30 点样方式：点状点样、带状点样 点样设备：毛细管、微量注射器、自动点样装置 2.4平面色谱的操作方法 2.4.2 展开 展开前色谱床及层析缸应先用溶剂蒸汽饱和——平衡。 展开方式：上行展开、下行展开、径向展开、水平展开（溶剂从两边向中间展开）. 优点：操作简单，重现性好. 缺点：展开时间 较长 ①上行展开法 ②径向展开法（水平法） 展开速度较上行法快 径向展开法 2.4.3定位与定性 定位方法 喷洒显色法：将显色剂溶液用喷雾器均匀喷洒在色谱床上; 熏蒸显色法：把滤纸或薄层板放入充满碘蒸气或氨水的密闭容器内使之显色; 紫外光显色法：含共轭双键的有机物可吸收紫外光显出暗色斑点或辐射出荧光。 ③双向展开法 点样后先用溶剂A使原点向垂直方向展开, 至溶剂达到前沿后停止(图b);用溶剂B再向与原方向垂直的另一方向展开,最后组分斑点将按45°方向分布(图c) a 色谱床的影响 Rf决定于物质的KD和两相的截面积. 滤纸的厚薄及其松紧程度、吸附剂的粒度均影响Rf值。 定性方法： （1）斑点的Rf值（或泳动距离）定性 影响Rf值（或泳动距离）的因素: b 相对湿度的影响 吸附剂的活度随相对湿度的增大而降低。 20cm×20cm的硅胶薄层板在50%的相对湿度中： 放置3分钟 失去活性一半 放置15分钟 吸附水分达最大值 薄层在相对湿度为1-80%的情况下展开，Rf值可以相差3倍。 最佳相对湿度范围决定于溶质和溶剂的极性，极性越大，相对湿度范围也相应增大。 第2章 平面色谱 2.1概述 2.2滤纸及薄层板 2.3平面色谱的流动相（展开剂） 2.4平面色谱的操作方法 2.5高效薄层色谱法（HPTLC） 2.1.1平面色谱法的分类与原理 平面色谱是一种开放式的离线操作色谱， 分类如下： 纸色谱法 薄层色谱法 薄层电泳法 2.1概述 纸色谱法 以滤纸为载体的液相色谱法。 滤纸中的纤维素能吸收20~25%的水分，其中6%左右的水分通过氢键与纤维素上的羟基相结合，形成液-液色谱中的固定相。 固定相：滤纸上的结合水 流动相：与水不相溶（或部分相溶）的溶剂 分离原理：被分离物质在两相中的分配系数不 同而分离. 薄层色谱法 将固定相于玻璃或铝箔等载板上涂布成均匀的薄层。展开剂（流动相）借助毛细作用从薄层板点样的一端展开到另一端时使不同物质得到分离。 分离原理随固定相不同而异，可分为吸附薄层、分配薄层、离子交换薄层 以及凝胶薄层等。 电泳法 电泳：带电粒子在直流电场作用下向异性电极移动。 电泳法:带电荷的被分离物质在纸、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺凝胶等惰性支持介质上，由于粒子的大小不同以及所带的电荷种类、 数量不同，在一定电场的作用下，向电荷相反的电极方向以不同速度迁移而得到分 离。 比移值Rf是溶质移动距离与 流动相移动距离之比，即 X:原点与斑点中心的距离; Y:斑点中心与溶剂前沿的距离 Rf=1时，组分随展开剂移至溶剂前沿 Rf=0时，组分留在原点 所以,Rf的数值在0~1之间 1.比移值Rf 2.1.2保留值 若Rf 值的重现性较差时，可将被分离物质与一 参比物在同一薄层分离。参比物比移值Rf (i)与被测 物比移值Rf(s)之比称为相对比移值。 Ri,s的重现性优于Rf值，数值可大于或小于1。 2.相对比移值 3. 分配系数与比移值的关系 两相达到分配平衡时，某组分在固定相中的浓度（Cs）与在流动相中的浓度（Cm）之比称为分配 系数KD ，即 Rf与 KD 的关系可推导如下： 设x为溶质斑点中心的移动距离，y为斑点中心与溶剂前沿的距离。 即x=r’Cm 即=yr”Cs 式中：r为与固定相截面积As和流动相截面积Am有关的常数。 r = As/Am 一定条件下，Am、As为定值, 所以Rf的大 小主要决定于KD 。每种物质在一定条件下 KD值不变，所以Rf值可以作为定性的依据。 2.1.4平面色谱的特