免疫浊度技术课件.ppt

E. Dalla Dea ESTS 免疫反应进展 1897年 Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应 抗血清混合出现沉淀 1905年 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加于 其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行 1946年 Oudin 报告了试管免疫扩散技术 1965年 Mancini 提出单向免疫扩散技术，使定性 免疫试验向定量化发展 1966年 免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、微 量、自动化的新阶段。 透射比浊 / 散射比浊 乳胶　　2 种反应模式: 反应过程图 吸光度/时间 检测模式图 钩状效应 钩状现象 抗体过剩区 沉淀随抗原量的加入而增多 上清液中仍然有游离的抗体 平衡区 产生最大量的沉淀 没有游离的抗原和抗体 抗原过剩区 由于抗原量过多，造成小的免疫复合 物出现, 上清液中有游离的抗原 各组份的作用 缓冲体系: 提供最适合反应条件,提高反应灵敏度。 避免非特异性反应。 缩短反应时间。 主要反应物: 完成抗原抗体反应所需的成份。 校准: 建立测定吸光度和物质含量之间的计算关系。 质控: 验证校准。 1 2 Conjugate-antibody complexing 2 1 3 Inhibition of complexing by hapten (drug) 1. Conjugate (hapten on carrier)2. Antibody3. Hapten (drug) 速率散射抑制法(670nm) TDM检测 Edited by E. Dalla Dea ESTS 实验　免疫浊度技术 实验　免疫浊度技术 免疫测定原理 利用抗原抗体反应检测标本中微量物质 抗原 + 抗体 抗原抗体复合物 Ag + Ab Ag * Ab 实验　免疫浊度技术 免疫测定特点 特异性 抗原性不同的物质不干扰 敏感性 ?g---ng---pg 可测物 蛋白质，酶，激素，药物 ， 毒品 实验　免疫浊度技术 免疫检测的基础—抗原抗体间的特异性反应 手工操作 自动化分析 免疫比浊分析技术发展 实验　免疫浊度技术 两 个 阶 段 测定抗原抗体形成后的阶段 散射(终点)比浊 测定抗原抗体结合的峰值 速率散射比浊 免疫比浊法分类 当一束光 线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个 因素的影 响而使光 的强度减 弱 透射比浊法: 在光源的光路方向（00） 测量透射光强度和被检测 溶液微粒浓度关系的方法。 散射比浊法: 在光源的光路方向（50-960） 角的方向上测量散射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。 实验　免疫浊度技术 光源 滤光片 反应杯 透射光检测 散射光检测 实验　免疫浊度技术 一、散射免疫比浊分析原理 散射比浊法：在液相中可溶性抗原、抗体特异性结合，形成一定大小的复合物粒子，当入射光沿水平轴照射在粒子颗粒上时，光线被颗粒吸收或折射，发生偏转，其偏 转的角度与发射光的波 长和复合物颗粒大小和 多少有关。散射光的强 度与复合物的含量成正 比，即待测抗原越多， 形成的复合物越多，散 射光就越强。 影响散射信号的因素： 如入射光的波长、偏振、 微粒大小、浓度、质量、 以及检测点的距离。 实验　免疫浊度技术 （一）散射颗粒与散射光 Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量呈正比，与散射 光的夹角呈正比，与波长呈反比。 在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体积，减少入射光的波 长，扩大散射光夹角等因素，均可增加检测的敏感度。 如果颗粒直径比入射光的波长小的多 则散射光的分布比较均匀 如果颗粒直径接近入射光的波长， 则散射光的分