MinuteTM植物质膜提取试剂盒储存：所需附加材料.PDF

Invent Biotechnologies, Inc. MinuteTM 植物质膜提取试剂盒 目录号：SM-005-P 描述： 植物膜蛋白占植物细胞总蛋白的很小一部分，但是在植物生理学中起着非常重要的作用。传统的植物膜蛋白分 离纯化方法是蔗糖密度梯度离心法和双液相法。这些方法虽然比较有效，但是需要超高速离心和大量的起始原 材料，操作过十分繁琐和费时。为了克服植物膜蛋白提取中的缺点，我们特别开发了此款植物膜蛋白提取试剂 盒。植物组织首先通过缓冲液A 中致敏，匀浆，然后通过一个特殊的离心管柱，在此过程中匀浆的组织通过柱 子特有的Z 字形通路后细胞膜被切割成大小相等的碎片，后续无需超高速离心，通过差速离心法和密度梯度离 心法将天然的质膜蛋白从未破裂的细胞，细胞核，细胞质和细胞器的混合物中分离出来。在每次实验中仅需使 用相同量的起始材料，离心力和离心时间，即可高度富集膜蛋白，并保证一致性良好。整个操作过程大约1 小 时可以完成。 应用： 试剂盒用于快速从植物组织中分离天然膜蛋白，可应用于SDS，immunoblottings ，ELISA ，IP ，膜蛋白质 结构分析，2-D ，酶活性测定及其他应用。 试剂盒组份 （50 次）： 1. 25 ml 裂解液A 2. 10 ml 裂解液B 3. 50 个离心管柱 4. 50 个收集管 5 ．4 根塑料研磨棒 6. 组织分离粉 储存： -20℃储存 所需附加材料 1XPBS 涡旋震荡仪 台式离心机 1 Tel ：4006468368 Email ：support@ Invent Biotechnologies, Inc. 说明书中rpm 根据Eppendoff 5415C 台式离心机换算 重要产品信息 1. 仔细阅读整个操作说明。将缓冲液A 和缓冲液B 完全解冻后摇匀，放置于冰上。将离心管柱和接收管套管 放置于冰上预冷。 2. 所有离心步骤都需要在4℃室温下或者低温离心机中进行。 3. 研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入缓冲液A 中。蛋白酶抑制剂可以选择添加或不添加。 4. 推荐使用BCA 试剂盒用于蛋白浓度测定 膜蛋白分离步骤 组织匀浆：由于植物样品的多样性，选择最佳的匀浆方法是得到最佳结果 的关键。 1. 将离心管柱及接收管套管放置冰上预冷 2. A. 大部分较软的植物组织样品 ，将新鲜组织或冷冻组织（200-300mg ）切成小片 （1-2mmX1-2mm），放入离心管柱套管上，用1ml 吸头反复挤压组织减少体积，称取50-80mg 组织分离粉加入离心管柱中，用塑料棒反复扭转研磨组织1-2 分钟。加入100ul Buffer A 至离 心管柱中，然后继续研磨几分钟，加A 至满为止，开盖冰上孵育5 分钟。接转步骤3 。 B ．含水量较多的组织样品(例如水果组织) ，将大约300mg 组织样品剪切成小块放入离心管柱 中，台式离心机最高速离心1 分钟去除多余水分，然后按照上一条描述方法匀浆，匀浆后冰上 孵育5 分钟，接转步骤3 。 C ．较难研磨的组织样品（例如根和水稻叶片），匀浆步骤可在离心管柱外用研钵或同类匀浆 设备进行操作。匀浆后，加入适量的Buffer A （大约300-400ul ），冰上孵育5 分钟，将匀浆好 的样品转移到离心管柱中，然后接转步骤3 。 3. 盖上盖子，14000rpm （16,000Xg）离心30 秒。（需要最短时间达到设定转速） 2 Tel ：4006468368 Email ：support@ Invent Biotechnologies, Inc. 4. 弃去离心管柱，涡旋大力震荡10-20 秒重悬沉淀。 以下步骤将植物组织匀浆分为四个组分：细胞核、细胞质、细胞器和质