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Primer-BLAST - abc - 北京大学.PDF
Primer Design 马越,邓迪,郭柏宏,刘璐萍 G18 北京大学深圳研究生院 2015年12月11日 OUTLINE 背景介绍 设计与检索 验证 1 2 3 OUTLINE 背景介绍 设计与检索 验证 1 2 3 1 Background (1) PCR (Polymerase Chain Reaction) ——图片引自扬州大学遗传学精品课件 1 Background (2) PCR Varieties 反转录PCR (RT-PCR) 荧光定量PCR (RTFQ PCR) 反向PCR (Inverse PCR) 不对称PCR (Asymmetric PCR) 多重PCR (multiplex PCR) 巢式PCR (queshipcr) 递减PCR (touchdown PCR) 1 Background (2.1) 反转录PCR (RT-PCR) 先将mRNA反转录成cDNA ,然后再以cDNA为模板,对 mRNA进行扩增。 mRNA的引物选择: 1. 随机六聚体引物——不特异 2. Oligo (dT)——对mRNA特异 3. 特异性引物——最特异的引发方法 —— 图片引自 1 Background (2.2) 荧光定量PCR (RTFQ PCR) 通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,利用荧光信号积累实 时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 —— 图片引自http :// 荧光定量PCR引物设计需注意: 1. 扩增的片段不能太大,最好在100bp-250bp之间; 2. 引物的特异性强。 1 Background (2.2) 荧光定量PCR (RTFQ PCR) 技术 引物 探针 Taqman 技术 直线型的寡核苷酸 Beacon 技术 相同 环状的寡核苷酸 FRET 技术
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