PCR 技术研究进展.PDFVIP

《生物工程进展》2001 ,Vol . 21 ,No . 4 PCR 技术研究进展 陶生策 　张治平 　张先恩 ( 中国科学院武汉病毒研究所 　武汉 湖北 　430071) 摘要 　PCR (Polymerase chain reaction) 在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用 。本文 对 PCR 技术的必威体育精装版进展作一简要综述 ,包括 :热循环仪的改进 , 引物的软件设计及网络设计 ,各种 DNA 聚合酶体系及其特性 , 多种 PCR (Multiplex PCR) ,DNA shuffling , PCR 芯片 , 固相 PCR 和 电子 PCR ( Electronic PCR) 的原理和应用 。 关键词 　多重 PCR 　DNA shuffling 　PCR 芯片 　固相 PCR 　电子 PCR 　　由Mullis 在 1983 年建立的 PCR 方法[ 1] 已成为 DockTM System (RAD MJ Research) 的这两部分可以分 分子生物学及其相关领域的经典实验方法 ,其应用 开远达 3m ,节省实验室空间 ,便于进行 自动化操作 。 已趋于多元化 ,从基因扩增与基因检测 , 到基因克 同时有多种形式的加热部分可供选择 ,可以满足不 隆、基因改造 、遗传分析 ,等等 ,甚至扩展到非生物学 同的要求 。 领域 ,如 :作为商品标识物 ,用以跟踪一些易燃易爆 12 　引物设计与合成 以及有销售控制的商品[2 ] 。技术的本身也获得长足 引物的设计可通过计算机和网络来实现 。网上 进步 ,可靠性不断提高 。同时 ,在聚合酶链式反应这 有许多提供免费在线引物设计服务的网址和软件 , 一基本原理的基础上发展了一系列新的概念和实验 例如 :NetPrimer (www. premierbiosoft . com) 。在线 引 方法 ,它们在生命科学研究中有重要的应用价值 。 物设计的优点在于 : 1) 无须精通软件的操作 。2) 可 同时分析更多的变量 。常用的单机引物设计软件有 PCR 关键技术进步 很多不 同的产 品 , 各有其优点 。RightprimerTM (Bio 11 　热循环仪 Disk) 具有超强校对功能 ,可将待扩增序列的可能引 市场上有众多的产品 ,在质量和技术上首推 PE 物在很短的时间内, 通过查找 Genebank , 而与背景 ) TM 及 MJ reasearch 。总的发展趋势是 1 无油操作 ,要求 DNA 校对 ,从而找到特异性极佳之引物 。Oligo 60 的反应体积小 ,PE 2400 可做小至 5μ ) L 的反应 ;2 升 (Molecular Biology Insights ,Inc . ) 适合于 Multiplex PCR 降温速度快 ,PE9700 可达到 35 ℃/ s ,温控精度及静 和 Consensus PCR 的引物设计 ,并能给出适合的 PCR 态样品温度均衡性高 ,这一点是通过控制反应管内 条件 。Primer Premier 41 ( Premier biosoft ) ,可以在核 的温度 ,而非加热块的温度来实现的;3) 界面友好 ,