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akt1基因沉默降低小鼠乳腺癌细胞的肺转移能力
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(3):14~19
Akt1基因沉默降低小鼠乳腺癌细胞的肺转移能力
刘海艳 顾玉超 宓文义 于文功
(中国海洋大学医药学院 青岛 266003)
摘要 Akt1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与调节细胞的代谢、生长和发育。作为一种原癌
基因,Akt1在许多人类肿瘤中表达显著增高,促进肿瘤转移;但也有研究表明,Akt1的活化可抑制
乳腺癌细胞的侵袭和转移。为了深入探讨Akt1在肿瘤发生发展过程中的作用,采用RNA干扰技
术沉默了高转移小鼠乳腺癌细胞4T1中Akt1的表达。MTT法检测发现,Akt1沉默不影响4T1细
胞的增殖能力;Transwell法检测证明,Akt1沉默可降低4T1细胞的迁移能力。与以上结果相一
致,Akt1沉默不影响乳腺癌形成原位瘤的能力,但显著降低其体内肺转移能力。结果表明,Akt1
在小鼠乳腺癌细胞转移过程中发挥重要作用,并提示Akt1可能成为乳腺癌治疗的靶点。
关键词 Akt1 乳腺癌 细胞迁移 肿瘤转移
中图分类号 Q819
Akt是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可通过磷脂 维细胞的侵袭能力[3,8~9],但可抑制 MDAMB231细胞
酰肌醇3激酶(PI3K)依赖的机制被胞外信号激活。目 [10]
的迁移能力 。在乳腺癌中也发现Akt1异常表达和
前发现 Akt有三个家族成员 Aktl/PKB、Akt2/PKB、
α β 活性改变,并在乳腺癌的转移过程中发挥重要的作用。
Akt3/PKB。它们的氨基端含有1个血小板-白细胞c [11]
γ 降低Akt1水平抑制ErbB2介导的乳腺癌体内转移 ;
激酶底物同源结构区域(pleckstrinhomology,PH),可介 而过表达myrAkt1可抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭
导脂质—蛋白质和(或)蛋白质—蛋白质之间的相互作 [12]
能力 。Akt1活化还可促进 ErbB2介导的乳腺肿瘤
用。Akt通过PH区特异性与PI3K的类脂产物磷酯酰 [6]
发生但抑制其侵袭能力 。这些结果表明,Akt1在不
肌醇3,4,5三磷酸[PI(3,4,5)P3]结合募集到细胞膜 同的细胞型或肿瘤的不同发展阶段所起的作用也
上,并通过上游磷脂酰肌醇依赖性激酶 1,2(PDK1、 不同。
PDK2)磷酸化进入活化状态。激活的Akt重新定位到 为了进一步研究Akt1对肿瘤发生发展的影响,本
胞质、核内或细胞内的其他部位,磷酸化大量的底物蛋 文采用RNA干扰技术建立了Akt1稳定沉默细胞模型,
[1]
白,最终调节细胞的增殖、分化、存活和迁移等 。 并通过体外和体内实验研究了Akt1在乳腺癌生长和转
恶性肿瘤细胞通过复杂的信号通路获得攻击性行 移过程中的作用。
为,这些信号通路参与调节细胞的生长、存活、迁移、侵
1 材料与方法
袭等重要功能。PI3K/Akt信号通路与上述功能密切相
关,所以该通路中的一个或多个信号组分失调常常会 1.1 细胞与培养基
导致疾病的发生[2]。近年来研究发现,Akt1不但影响 小鼠乳腺癌细胞株4T1为美国KarmanosCancer
肿瘤细胞的增殖、凋亡,而且对许多肿瘤的侵袭和转移 Insitute的FredR.Mil
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