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动物细胞培养中微生物污染的检测曾卫东
12 浙江畜牧兽医 2003 年第 2 期 动物细胞培养中微生物污染的检测 1 2 曾卫东 , 董 青 ( 1. 浙江大学奶业科学研究所, 杭州 3 10029; 2. 泰顺县罗阳镇兽医站) 中图分类号: Q 93332 文献标识码: B 文章编号: (2003) 0200 130 1 动物细胞培养体系造成污染的微生物主要 生长, 形态有丝状, 单细胞和长链状排列的细 是细菌、真菌、支原体等。判断所培养细胞是否 胞, 96h 时肉眼才能观察到棉絮状的菌丝团 被微生物污染, 可以通过以下方法进行检测。 等。污染酵母菌培养物, 类似于细菌污染, 在 1 细菌污染的观察及检测 倒置相差显微镜下可以观察到圆形或卵圆形 在细菌污染培养物的初期, 由于受培养体 的酵母菌, 有时可见酵母菌联接成假菌丝。开 系内抗生素的作用, 其繁殖处于抑制状态, 细 启瓶盖, 可闻到酒或酸的发酵样异味, 随着培 胞生长不受明显影响, 不易为肉眼观察到, 易 养液的酸度下降, 培养液外观呈现黄绿色。污 被忽视。怀疑培养细胞有细菌污染时, 可将细 染霉菌培养物, 在倒置相差显微镜下能见到 胞置于无抗生素的培养液中进行培养, 若培养 成树枝状生长的菌丝。当怀疑有真菌污染培 物确有细菌污染, 就可在 24h 内获得阳性结 养物时, 除可用倒置相差显微镜对培养液进 果。当培养体系内细菌数量达到一定程度时, 行直接镜检和染色法检查外, 还可用收集培 在消耗大量养分的同时产生大量代谢产物, 从 养物, 反复冻融后, 用加双层微孔滤膜的微型 而导致培养液外观混浊。在倒置镜下可见视野 滤器过滤除菌。 内布满点状的细菌颗粒, 原来清晰的背景变得 3 支原体污染的检测 模糊。亦可用下列方法进行确定: 滴加数滴结 3. 1 培养法 将疑有支原体污染的培养物 晶紫液在已固定的细胞涂片上染色 1 后 0. 5 经- 20 ℃冻融后接种到支原体琼脂平 m in m l 用水洗去染液, 再滴加碘液 1 后倾去碘 皿上, 于 37 ℃无氧条件下培养 7～ 14 , 观察 m in d 液, 滴加 95% 酒精脱色, 1 后用水冲洗, 滴 有无支原体菌落形成。 m in 加沙黄染液复染 0. 5 , 用水冲洗后待干镜 3. 2 荧光染色法 荧光染料用 m in H o ech st 检。固紫染色阳性呈紫色, 对青霉素敏感; 固紫 33258, 支 原体 内含有 DN A , 通过支 原体 染色阴性呈红色, 对氯霉素敏感, 大多数球菌 DN A 结合荧光染料后, 在荧光显微镜下能见 呈固紫染色阳性, 杆菌呈阴性。 到发绿色荧光的小亮点。被支原体污染的细 2 真菌污染的观察及检测 胞不仅在细胞核而且在细胞核外及细胞膜上 真菌是
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