鸡贫血病毒vp1和vp2基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性的初步研究.pdfVIP

第30卷 第7期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30．NO．7 2008年 7月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Ju1． 2008 鸡贫血病毒up1和vp2基因在毕赤酵母中的 表达及产物免疫学特性的初步研究 林 欢 ，高宏雷 ，王晓艳 ，高玉龙 ，宋修庆 ，李术强 ，王笑梅 (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 2中国科学院生物物理研究所，北京1001O1；3．哈尔滨工业大学海洋学院，山东威海264209) 摘 要：利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vpl、vp2基因，经EcoR I和 Not I双酶切处理，纯化后，克隆至EcoR I和 Not I双酶切处理的表达载体pPIC9K中，构建了真核表达质粒 pPIC9K·VP1和pPIC9K—VP2。将pPIC9K—VPl和pPIC9K—VP2转化至毕赤酵母SMDl168中，在0．5％甲醇诱导下表 达CAV—VP1、CAV—VP2蛋白，运用Western blot和Dot．ELISA鉴定表达蛋白：结果表明，重组酵母菌株表达出约 54 1(u和24 ku的目的蛋白，与针对鸡贫血病毒的单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物乳化后免疫6周龄 BALB／c小鼠，用ELISA、IFA检测免疫小鼠血清，均检测到抗体。 关键词：鸡贫血病毒；viol基因；vp2基因；真核表达；毕赤酵母 中图分类号：$852、659 文献标识码：A 文章编号：l008．0589(2008)07．0495—05 Expression of chicken anemia virus vpl and vp2 gene in Pichia pastoris LIN Huan ，GAO Hong—lei ，WANG Xiao—yan ，GAO Yu—long ， SONG Xiu—qing ，LI Shu—qiang3，WANG Xiao—mei (1 Division of Avian Infectious Diseases，National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology，Harbin Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Science，Harbin 1 50001 China；2．Institute of Biophysics，Chinese Academy ， of Sciences，Beijing 100101，China；3．Maritime Academy，Harbin Institute of Technology，Weihai 264209，China) Abstract：viol and vp2 gene from chicken infectious anemia virus(CIAV)were amplified from pBluemCAV by PCR and cloned into pPIC9K vector，respectively．The recombinant plasmid pPIC9K．VP 1 and pPIC9K．VP2 were transformed into SMD 1 1 68 cells and proteins expressions were induced with methano1．A 54 ku and 24 ku protein were su