鸡白细胞介素-6的原核表达及其对疫苗免疫增强效果的研究.pdfVIP

第30卷 第7期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30．NO．7 2008年 7月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Ju1． 2008 鸡白细胞介素一6的原核表达及其 对疫苗免疫增强效果的研究 谢彩华 ，闫若潜 ，崔保安 ，赵雪丽 ，吴志明 ，张志凌 ，张 健 (1．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；2．河南省动物疫病预防控制中心，河南郑州450008) 摘 要：本研究采用PCR技术，扩增、克隆了鸡白细胞介素一6(ChlL一6)成熟肽基因并进行原核表达，对表达 的鸡白细胞介素一6组蛋白(rChIL一6)通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化，经测定rChlL一6 的促小鼠脾脏淋巴母细胞的增殖能力来评估重组蛋白的生物学活性；用4个不同浓度的rChlL一6在不同部位与 NDV活疫苗、A1V H5N1灭活疫苗同时肌肉注射来评价其免疫增强作用。研究结果表明，表达rChlL一6为25 l(LI 左右，经纯化后的蛋白纯度在95％以上；100 pg／n~rChlL一6注射组具有较高的促小鼠脾淋巴母细胞增殖活性；不 同浓度的rChIL一6注射组对NDV和AIV H5N1疫苗都具有较好的免疫增强作用，但对其免疫抗体产生时间及抗 体滴度峰值出现和维持时间均没有明显的影响，其中0．03 txg／mL rChlL一6浓度注射组的对鸡疫苗的免疫增强作用 最明显，过高或过低浓度的rChIL一6对疫苗免疫增强作用不显著。这些研究为新型免疫增强佐剂开发以及鸡免疫 失败性疫病的预防和治疗奠定了基础 关键词：鸡白细胞介素一6；基因克隆；蛋白表达；免疫活性；免疫增强 中图分类号：$852．42 文献标识码：A 文章编号：1008—0589(2008)07—0557—05 Enhancment of immUnerespones to vaccines by recombinant chicken interleukin一6(ChlL一6) XIE Cai—hua ，YAN Ruo—qian ，CUI Bao—An ，ZHAO Xue．1i ， WU Zhi—ming~．ZHANG Zhi—ling2 ． ZHANG Jian (1．College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，China 2 Henan Center for An imal Diseases Control and Prevention，Zhengzhou 450008， China) Abstract：The chicken interleukin一6(ChlL一6)gene was PCR amplified，sequenced and cloned into the prokaryotic expression vector pQE30．The expressed recombinant protein(rChlL一6)was purified under denaturing condition，refolding in renaturation buffer and dialysised．The bioactivity of rChlL一6 protein was estimated by testing its ability to stumulate the prolif