粗毛纤孔菌糖苷水解酶5 基因克隆及蛋白质结构分析 - 大学化学.pdf

第 5 1 卷 第 2 期 林 业 科 学 Vol. 5 1 ，No. 2 2 0 1 5 年 2 月 SCIENTIA SILVAE SINICAE Feb ． ，2 0 1 5 doi :10 ．11707 / j ．100 1-7488 ．20 150220 粗 毛纤孔菌糖苷水解酶 5 基 因克隆及 蛋白质结构分析* 刘 晓晗 王 峰 董 爱荣 陈俏丽 刘立宏 零雅茗 王博文 丁 晓霞 王世 新 (东北林业大学林学院 哈尔滨 150040 ) : 【 】 5 ， 、 摘 要 目的 克 隆得 到粗毛 纤孔 菌 糖 苷 水解 酶 基 因 并 对 该 基 因进 行 生 物 信 息 学 分 析 蛋 白 质原 核 表 达 和 ， 。【 】 ， PDA 。 TＲIzol 酶 活研究 为糖 苷 水解 酶 的利 用提供依据 方法 分 离 纯 化 粗毛 纤孔 菌 并 于 斜 面长 期 保 存 应用 提 ＲNA ， AMV ＲNA cDNA ， cDNA ; NCBI BLAST 取 粗毛 纤孔 菌 总 通 过 反转 录 系统将 反转 录 成 构 建 文 库 应用 分析并 检 测 糖 苷 水解 酶基 因家族 5 阳性 序 列 ，ＲACE 法 克 隆基 因全 长 命 名 为 IhGH5 -1 并提 交 NCBI 注 册 ; OＲF-Finder 分析 IhGH5 -1 ， ; NCBI 5 ，Clustal W 基 因开放 阅读框 推导 出氨 基 酸 序 列 筛 选 登 录 的糖 苷 水 解 酶 家 族 同源 序 列 进 行 保 守 结构域 区段 多序 列 比对 ; 应用 Mega 5. 05 选用 WAG + G 模 型 构 建 最 大似 然树 ; 应用 PSIPＲED server 对 IhGH5 -1 进 行 ， SWISS-MODEL IhGH5 -1 ， VMD1. 8. 6 α 螺旋和 β 折叠 的蛋 白质二 级 结 构 分 析 应 用 对 进 行 三 维 建 模 应 用 分 析 IhGH5 -1 ; PCＲ ， pQE-30 UA 三