芹菜核酸内切酶celi 基因的克隆及其表达分析 - 南京农业大学学报.pdf

摇 南京农业大学学报摇 2014,37(4):39-45 http:/ / 摇 Journal of NanjingAgricultural University doi:10.7685/ j.issn.1000-2030.2014.04.006 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 田畅,王枫,蒋倩,等.芹菜核酸内切酶CELI基因的克隆及其表达分析[J].南京农业大学学报,2014,37(4):39-45 芹菜核酸内切酶CELI 基因的克隆及其表达分析 田畅,王枫,蒋倩,徐馨琰,刘君,熊爱生* (南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/ 农业部华东地区园艺作物生物学 与种质创制重点实验室/ 园艺学院,江苏 南京210095) 摘要:CELI是一种单链特异性核酸酶(singlestrand specific nuclease),主要应用于清除DNA或RNA双链分子存在的单链。 测定不同品种芹菜中CELI基因非生物胁迫诱导表达情况,以进一步研究芹菜中核酸内切酶的功能及应用。 以芹菜(Apium graveolens L.)为试验材料,分别从‘六合黄心芹爷和‘文图拉爷中克隆出核酸内切酶CELI基因序列。 通过生物信息学的方法 对所得序列进行分析,通过实时定量PCR方法进行该基因在芹菜中表达分析。 结果表明:来源于2种芹菜的CELI基因核 苷酸序列高度保守,基因全长均为891bp,分别编码296个氨基酸。 2种芹菜的CELI基因核苷酸序列之间共有20个位点 3 3 不同,导致3个氨基酸位点发生改变。 2种芹菜该酶的蛋白质相对分子质量分别为33.88伊10 和33.92伊10 ,pI值分别为 6.51和6.37。 进化分析显示,芹菜中的CELI 与同属于伞形科的欧芹进化关系最近,伞形科 CELI进化上更接近于菊科。 实时定量PCR分析表明,芹菜中CELI基因在根、茎、叶、花不同组织及不同品种之间的表达量有明显差异。 对2种芹菜分 -1 -1 别进行4 益、38 益、0.2 mol·L NaCl、200 g·L PEG处理2 h,表达分析显示,4种处理条件下芹菜中CELI基因表达量有明 显差异,其中PEG处理表达量呈明显下降趋势。 结论:通过逆境处理后的基因表达分析发现,芹菜中CELI基因对非生物胁 迫有响应,‘六合黄心芹爷中CELI基因的诱导表达量大于‘文图拉爷。 关键词:芹菜;核酸内切酶;实时定量PCR;基因克隆;表达分析 中图分类号:S636.3摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2014)04-0039-07 Cloning and expression pattern analysis of CELI gene in celery TIAN Chang,WANG Feng,JIANG Qian,XU Xinyan,LIUJun,XIONG Aisheng* (State Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement/ Key Laboratory of Biology and Germplasm Enhancement of Horticultural Crops in East China,Ministry of Agriculture/