酵母核糖核酸分离和组分鉴定.pptVIP

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定;一、实验目的 了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法;二、实验原理 酵母核酸中 RNA 含量较多，在细胞中除了核酸外还有蛋白质、多糖及其他多种化合物 RNA可溶于碱性溶液，在碱性提取液中加入酸性乙醇溶液可以使RNA析出 RNA是由核糖、嘌呤/嘧啶碱和磷酸组成的，在提取的 RNA 中加硫酸煮沸即可得到这些组分的混合溶液——可对它们分别进行定性鉴定，以证明提取物是否为核酸 磷酸的鉴定：磷酸与定磷试剂（钼酸铵）作用产生蓝色的磷钼酸铵沉淀 核糖的鉴定：核糖与苔黑酚试剂反应呈绿色 嘌呤碱的鉴定：嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银沉淀 脱氧核糖的鉴定：常用的方法是二苯胺法 脱氧核糖＋二苯胺试剂 蓝色化合物;三、实验器材 乳钵 水浴锅 滴管 烧杯 锥形瓶 量筒 锥形瓶 离心机 离心管;四、实验材料与试剂 酵母粉 0.04mol/L NaOH溶液 酸性乙醇溶液 95％乙醇 乙醚 1.5mol/L硫酸溶液 浓氨水 0.1mol/L硝酸银溶液 三氯化铁浓盐酸溶液 苔黑酚乙醇溶液 定磷试剂;五、实验操作 酵母核糖核酸的分离 将5g酵母粉悬浮于30mL0.04mol/L NaOH溶液中，并在乳钵中研磨均匀 将悬浮液转移至100mL锥形瓶中，在沸水浴中加热30min，冷却 将悬浮液转入离心管中，3000rpm离心15min，将上清转移至新离心管中，缓慢加入10mL酸性乙醇溶液 待核糖核酸沉淀完全后，3000rpm离心3min，弃上清 用10mL 95％乙醇洗涤沉淀2次（2000rpm，2min），10mL乙醚洗涤沉淀1次后，用10mL乙醚转移沉淀至布氏漏斗中，抽滤 沉淀在空气中干燥，得到酵母核糖核酸;核糖核酸组分的鉴定 称取200mg提取的核酸，加入10mL1.5mol/L硫酸溶液，在沸水浴中加热10min，制成水解液 嘌呤碱的鉴定：取1支试管，在1mL水解液加入过量的浓氨水，然后加入约1mL0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀 核糖的鉴定：取1支试管，加入1mL水解液、2mL三氯化铁浓盐酸溶液和0.2mL苔黑酚乙醇溶液，置沸水浴中10min，观察溶液是否变成绿色 磷酸的鉴定：取1支试管，加入1mL水解液和1mL定磷试剂，在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色;六、实验思考 如何得到高产量的RNA粗制品？ 本实验RNA的组分有哪些？如何鉴定？