自身抗体检测蛋白芯片制备条件的优化及初步应用.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, August 25; 24(8): 1496-1504 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 技术与方法 自身抗体检测蛋白芯片制备条件的优化及初步应用 王国强, 高雪芹, 韩金祥, 潘继红, 黄海南 山东省医药生物技术研究中心 卫生部生物技术药物重点实验室, 山东省现代医用药物与技术重点实验室, 济南 250062 摘 要: 选择临床上常用的用于自身免疫性疾病抗体检测所对应的 12 种抗原, 运用 NBT/BCIP 显色反应策略, 研制一 种可同时检测 12 种常用自身抗体的蛋白芯片检测系统。应用NBT/BCIP 终点检测体系对每一种抗原的点样液、点样浓 度、血清稀释度进行优化, 制备出可同时检测 12 种自身抗体的蛋白芯片, 并通过对678 例病人血清和 120 例非病人血 清的检测进行敏感度和特异度评价。优化的点样液为0.1%TBST, 血清稀释度为 1:4, 12 种抗原的最佳点样浓度分别为: ANA 520 μg/mL, Ro-60/SSa 465 μg/mL, La/SSb 530 μg/mL, Jo-1 530 μg/mL, Scl-70 525 μg/mL, Sm 520 μg/mL, Ro-52/SSa 615 μg/mL, RF 340 μg/mL, CCP 465 μg/mL, u1RNP 410 μg/mL, CENP-B 490 μg/mL, dsDNA 580 μg/mL; 通过对678 份阳 性血清和 120 份阴性血清的检测, 该蛋白芯片技术对 12 种自身抗体检测的敏感度在 80%~96.3%之间, 特异度在 86.7%~100%之间, 与传统的检测技术有较高的符合率。我们研究的自身抗体检测蛋白芯片技术体系具有快速、方便、 高通量、廉价等优势, 易于商业化, 适合不同条件的临床需要。 关键词: 显色反应蛋白芯片, 自身抗体, 自身免疫性疾病 Protein-chip for Autoantibodies Profile Detection Guoqiang Wang, Xueqin Gao, Jinxiang Han, Jihong Pan, and Hainan Huang Key Laboratory for Biotech-drugs of the Ministry of Health, Key Laboratory for Modern Medicine and Technology of Shandong Province, Shandong Medicinal and Biotechnology Center, Jinan 250062, China Abstract: We selected 12 antigens corresponding to commonly used autoantibodies in clinical practice to prepare antigen microarray. We chose NBT/BCIP color reaction as the end detection strategy to dev