树鼩肝细胞体外分离培养体系的复建及主要影响因素分析.pdf

动 物 学 研 究 2009，Feb. 30(1)：24−30 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research DOI ：10.3724/SP.J.1141.2009.01024 树鼩肝细胞体外分离培养体系的复建及主要影响因素分析 1，2 3 1 1，2 3 1 3 1，* 张 顶 ，高 丽 ，张远旭 ，孙 丽 ，冯 悦 ，何有文 ，夏雪山 ，张华堂 （1. 中国科学院昆明动物研究所 动物模型与人类疾病机理重点实验室, 免疫生物学实验室和人类疾病灵长类动物模型研究团队， 云南 昆明 650223; 2. 中国科学院研究生院，北京 100049; 3. 昆明理工大学 生物与化学工程学院，云南 昆明 650224 ） 摘要：树鼩（Tupaia Belangeri）与人和灵长类亲缘关系较为接近，是乙型肝炎研究中备受关注的小动物模型， 而其原代肝细胞的分离和培养则是建立 HBV 体外感染模型及应用和基础研究的关键的第一步，但由于以往的文 献报道均较为简要，需要较长时间的摸索。本研究通过与机械分离法的直接比较，验证了两步灌注法在树鼩肝细 胞分离中的优越性。进而发现，在分离后的体外培养过程中，二甲基亚砜不仅能够促进和维持原代肝细胞的分化， 而且能够显著地抑制纤维状细胞群的出现。同时，肝细胞生长因子（HGF ）和表皮生长因子（EGF ）能够促进肝 细胞在体外长期存活。在此优化的条件下，原代培养可持续 4—5 周，并且较多的细胞聚集形成类似肝窦结构的 形态，从而为乙型肝炎病毒感染机理研究和药物筛选提供了必备的先决条件，也为丙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒 及单纯疱疹病毒等研究和药物筛选提供了可能。 关键词：树鼩；肝细胞；二甲基亚砜；肝细胞生长因子；表皮生长因子；分化 中图分类号：Q959.831 文献标识码：A 文章编号：0254-5853-(2009)01-0024-07 Crucial Factors for de novo Establishment of Long-term Primary Culture of Tree Shrew Hepatocytes 1, 2 3 1 1, 2 3 ZHANG Ding , GAO Li , ZHANG Yuan-xu , SUN Li , FENG Yue , 1 3 1, * HE You-wen , XIA Xue-shan , ZHANG Hua-tang (1. Immunobiology Laboratory and Overseas Team, Key Laboratory of Animal Model and Human Disease Mechanisms, Kunming Institute of Zoology, the Chinese Academy of Science, Kunming 650223, China; 2. Graduate University of Chinese Academy of Science, Beiji