高效液相色谱法测定饲料中的三聚氰胺郑州牧业工程高等专科学校兰.DOC

高效液相色谱法测定饲料中的三聚氰胺 郑州牧业工程高等专科学校 兰尊海 胡霞 [摘要] 采用高效液相色谱法测定饲料原料中的三聚氰胺。色谱柱为Kromasil C18柱，流动相为水-氨水-高氯酸，检测波长215nm。线形范围为0.5～50μg/mLRSD为0.90Abstract ] An HPLC method was developed for determination of melamine in feed. The experiment was carried out under the following conditions : column was Sino Chrom ODS-BP, mobile phase was water -ammonia -perchloric acid ,the wave length of UV detector was 215 nm .The linear range of melamine was 0.5～50μg/mL, the average recovery was 98% and the RSD was 0.90. The method was simple, fast and accurate. It can be used to determine the content of melamine in feed and feedstuff. [Key words] HPLC; feed ; CTK; melamine 三聚氰胺的分子式为：C3H6N6 分子量为： 126.13，无色单斜棱柱状晶体，溶于热水及热乙醇。含N量66.60%。三聚氰胺是一种重要的化工原料，广泛用于木材、塑料、涂料、造纸、皮革、医药、建筑和轻工等领域。近年来，发现有些不法商贩根据三聚氰胺含氮量高，不易被检测等特点，把三聚氰胺添加到饲料原料中以提高粗蛋白质的含量，导致饲料品质下降，侵害了饲料企业和养殖户的利益，同时给畜产品带来了安全隐患，危害人类健康。为此，我们研究建立此方法，用于快速测定饲料中的三聚氰胺，对饲料及饲料原料的识假、防假和打假有着非常重要的意义。 1 试验材料与方法 1.1 仪器与试剂 莱伯泰科LC600型高效液相色谱仪及紫外检测器，超声波清洗器，PH-3C型酸度计。 试剂：三聚氰胺，氨水，高氯酸，超纯水 1.2 三聚氰胺标准溶液：准确称取三聚氰胺标准品(99.9%)1.0000g于100mL容量瓶中,加高纯水溶解并定容,制成1000μg/mL的标准贮备液。 1.3 色谱条件 色谱柱: Kromasil C18柱,5μm,4.6×250mm;流动相:水:25%氨水=99:1,pH6.5(用高氯酸调节);流速:1.0mL/min;检测波长:215nm;进样量20;柱温:室温。 1.4 样品处理 称取饲料样品0.5g(精确到0.0002g)于100mL容量瓶中,约加70mL高纯水，把容量瓶放到已加热到60℃的超声波清洗器中超声１０分钟，冷却后用水定容到刻度，摇匀。用0.45μm的样品滤头过滤，上机进样20μl。 ２结果与讨论 ２.1 检测波长与保留时间 经紫外分光光度计的波长扫描，三聚氰胺在 205nm处有最大吸收，但此波长处干扰峰多，所以选215作为检测波长。按上述条件往液相色谱仪中进20μl三聚氰胺标准溶液（10μg/mL），三聚氰胺的保留时间为7.21min。见图１。 图1 三聚氰胺的保留时间 ２.２标准工作曲线的制备 按照试验条件和方法，分别进1.02，2.54，5.09，10.18，20.36，40.76μg/mL20μl，以三聚氰胺的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，见图2。三聚氰胺的回归方程为Y=5514.31X+10.592，相关系数r=0.9999。三聚氰胺的浓度在1～50μg/mL时有良好的线性关系。 图2 三聚氰胺的标准工作曲线 2.3 精密度试验 移取1.00mL的三聚氰胺标准贮备液（1000μg/mL）于100mL容量瓶中用高纯水定容到刻度，摇匀，制成10μg/mL的三聚氰胺工作液。取工作液20μl进样，连续进6次，三聚氰胺峰面积的RSD（n=6）为0.90%。结果见表1。 表1 精密度试验数据 次数 1 2 3 4 5 6 峰面积 2074 2057 2073 2063 2087 2033 RSD% 0.90 2.4 回收率试验 在经本方法测定过的不同的饲料样本中准确加入一定量的三聚氰胺，按同样的操作过程提取、测定，计算回收率。平均回收率为：103.8%。结果见表2。 样品名称 初始量 μg 添加量 μg 测定