采用Agilent Bio SEC-3 色谱柱分离重组人促红细胞生成素.PDF

采用 Agilent Bio SEC-3 色谱柱分离重组 人促红细胞生成素 应用报告 生物制药 作者 摘要 Phu T Duong and James Martosella 在重组蛋白的制备、纯化、储存和临床研究应用过程中，需要采用高灵敏度的分析技 安捷伦科技有限公司 术对其纯度进行监测。此外，生物技术和制药公司对分析重现性的要求也非常高。 2850 Centerville Rd, Agilent Bio SEC 色谱柱专为应对这些挑战而设计。该色谱柱填料表面覆盖有亲水性 Wilmington, DE 19808 的聚合物涂层，能有效地减少它与组分间的次级相互作用，实现极高的柱效和柱稳定 美国 性。它可使用有机改性剂，并针对低盐浓度条件进行了优化。这些条件对于提高 QC Linda L Lloyd 中蛋白质一级结构分析的效率非常关键。本文数据着重展现不同大小重组人促红细胞 安捷伦科技有限公司 生成素的分离。与其它许多生物分子一样，重组 EPO 蛋白的异质性（聚集体、二聚 Essex Rd, Church Stretton 体、单体）是由于其在生产过程中的修饰造成的。本文在中性磷酸钠缓冲液条件下， Shropshire, 英国 通过对流速、梯度程序和重现性等方面进行考察，优化了色谱分析方法。 引言 化学品与试剂 CHO 细胞产生的人 EPO 蛋白购自 Creative BioLabs 公司 重组人 EPO 蛋白是世界上许多生物制药公司广泛生产的治疗 （ ， ，美国）。磷酸二氢钠和磷酸 氢二钠 均购自 Shirley NY 药物之一。促红细胞生成素蛋白 (EPO) 是血浆里的一种糖蛋白 Sigma-Adrich公司（ St. Louis ，MO ，美国）。 激素。它是作用于骨髓中红细胞（红血球）前体的细胞因子。 EPO 控制着红血球的生成，并且还具有神经保护作用，可防止 LC 方法 多种潜在的脑损伤和一些组织中的细胞凋亡。重组人 EPO 蛋 表 列出了本实验采用的色谱条件。其它 变动已在相关色谱 图 1 白 (rEPO) 是应用重组 DNA 技术由中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞 中标出。 产生的。 rEPO 单多肽链含有 165 个氨基酸，预计分子量为 24000 道尔顿，表面糖基化后分子量为 30400 道尔顿。通过 采用多种类型的色谱柱，包括体积排阻色谱柱可实现 EPO 蛋 表 1. 基本色谱条件 参数 项目 白与其杂质的 HPLC 分离。本文数据着重展现了采用分析型体 色谱柱 Agilent B