试验七微生物细胞大小的测定.PPT

项目二 任务2-1微生物细胞大小的测定 基本原理 微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格或100小格两种，每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格（2 mm等分为200格），每格长度等于0.01mm（即10μm），是专用于校正目镜测微尺每格长度的。 操作步骤 1．目镜测微尺的标定 （ 1 ）放置目镜测微尺 取出接目镜，旋开接目镜透镜，将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上，然后旋上接目透镜，最后将此接目镜插入镜筒内。 （ 2 ）放置镜台测微尺 将镜台测微尺置于显微镜的载物台上，使刻度面朝上。 （ 3 ）校正目镜测微尺 先用低倍镜观察，对准焦距，当看清镜台测微尺后，转动接目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合，然后计数出两对重合线之间各自所占的格数。例如目镜测微尺(A）上5格对准镜台测微尺(B)上的2格，B的1格为10μm，2格的长度为20μm, 所以目镜测微尺上1小格的长度为4μm。 根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数，通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度： 目镜测微尺每小格长度（μm）=（两对重合线间镜台测微尺格数× 10）/两对重合线间目镜测微尺格数 同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 2. 例：酵母菌菌体大小的测定 （1）将酵母菌斜面制成一定浓度的菌悬液（10-2）。 （2）取一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。 （3）移去镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于该菌的长和宽。一般测量菌体的大小要在同一个标本片上测定10-20个菌体，求出平均值，才能代表该菌的大小。而且一般是用对数生长期的菌体进行测定。 3．取出目镜测微尺，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦试后，放回盒内保存。 注：结果计算? 长/μm＝平均格数×校正值；宽/μm＝平均格数×校正值；大小表示为宽/μm×长/μm 在高倍镜下测量酵母菌大小，将结果填入下表。 思考： 当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改变物镜，目镜测微尺每格所量的镜台上物体的实际长度是否相同？为什么？ * * 测微尺构造 细胞的实际大小（ L＝A×B ） 用镜台测微尺进行校正 计算目镜测微尺每小格代表长度(A) 菌体细胞相当于目镜测微尺的长度（B） 菌体大小的测定 安装目镜测微尺 A( μm)=（镜台测微尺格数×10）/目镜测微尺格数 ? ? ? ? ? 10 ? ? ? ? ? 9 ? ? ? ? ? 8 ? ? ? ? ? 7 ? ? ? ? ? 6 ? ? ? ? ? 5 ? ? ? ? ? 4 ? ? ? ? ? 3 ? ? ? ? ? 2 ? ? ? ? ? 1 菌体宽度 目镜测微 尺格数 菌体长度 目镜测微 尺格数 菌体大小（平均值） 长×宽（μm） 宽（μm） 长（μm） 菌 体 编 号