荧光定量PCR产品研发规程.doc.docVIP

荧光定量PCR产品研发规程 1．研发产品立项依据（项目可行性报告）： 需要检测的病原体是病毒还是细菌、真菌等其它病原体，致病菌是一种病原体或者是几种病原体。如果是针对病毒的检测，需要了解病毒的亚型和基因分型的标准。如果是针对基因的检测，需要检测的基因有哪些。 病原体的分类位置情况，病原体的感染和致病机制，病原体的生活史。 现有病原体检测的方法，各自的优劣，什么方法是目前认可的金标准，荧光定量PCR的优势。 病原体检测或诊断的临床意义，什么类型的样品最适合的样品，有多少适合检测的样品类型。 国内外同类产品情况：什么公司有同类的产品，有多少公司有该产品，占市场主导地位的是哪家公司的产品？技术原理和技术优势、质量标准和适用的检测样品类型，包装规格和说明书信息，其产品的市场反应情况，是否有有批文的产品。 市场需求情况（可由公司市场销售人员进行调研） 临床标本获得情况（是否可以得到阳性标本，从哪里得到临床样品，阳性样品量是否足够） SFDA报批的可能性（从生检所了解） 参比品（从生检所了解）：参比品主要是特异性参比品、敏感性参比品和最低检出量标准品。是否有国家标准品。 技术方法的文献资料： 主要是有无特异性的引物和探针序列，基因组片段，基因组序列。确定引物和探针序列以及在基因组上的具体位置。 Q-PCR（RT-QPCR，复合Q-PCR）扩增体系，扩增片断大小，探针类型和荧光标记类型。 检测灵敏性，进行灵敏度检测的质控品及其制备，最低检出率。 检测特异性，特异性检测的参考品极其参考品的范围。 可以检测的临床样品类型 针对不同种类临床样品的处理方法。 2．产品研制技术路线 (1) 基因组序列和序列比较：查找病原体的基因组序列，对于病毒检测，需要分析比对病毒亚型的基因组序列。对于基因检测，需要查找相关基因组序列。 （2）扩增引物与探针的选择： 根据文献资料和基因组序列，核实引物序列和探针序列，或者根据现有基因组序列，设计至少三种引物和探针组合，选择荧光染料和淬灭分子类型。 合成引物和探针 需要了解不同引物厂家的引物合成质量，包括价格，国内从事DNA合成的厂家很多，一般的PCR扩增引物都可以满足实验要求，但更应该关注荧光标记探针的质量。 阳性质控品的制备 利用阳性标本的PCR扩增产物来制备强阳性质控品（1x106拷贝/ul）和临界阳性质控品（1x102拷贝/ul）。 利用实验用水作阴性质控品 阳性标本和阴性标本的选择：确认阴、阳性样品的金标准。 主要原材料的选择、制备参考值（参考范围）确定产品性能评估等相关工作分析性能包括分析灵敏度、分析特异性、测定范围、测定准确性、批内不精密度、批间不精密度等。临床性能临床性能主要包括临床灵敏度、临床特异性等。临床性能评估应通过临床试验临床研究总样本数至少为500例。临床试验由申请人在提出注册申请前完成。产品研制情况核查注册检测第三类产品应当进行连续3个生产批次样品的注册检测。注册检测用样品由药品监督管理部门在对生产企业的质量管理体系考核合格后现场抽取。　　境内生产企业的 　 进行注册检测，申请人应当向检测机构提出书面申请，并提供注册检测所需要的有关技术资料、注册检测用样品及标准品或参考品。　　同一注册申请包括不同包装规格时，可只进行一个包装规格产品的注册检测。 医疗器械检测机构应当在授检范围内开展注册检测工作，并应当在规定的工作时限内出具检测报告。