蔓荆子总黄酮对NCI-H446细胞系肺癌干细胞特性的作用.pdfVIP

分类号 密级—— 学校代码 10542 学号2Q!!Q2191621 蔓荆子总黄酮对NCI．H446细胞系 肺癌干细胞特性的影响 Effectsof FructusViticisTotal Flavonoidson characteristicsof cancerstemcells lung derivedfrom NCI．H446cell1ine 研 究 生姓名 萱睦邀 指导教师姓名、职称 垒翌笠型塾撞 学 科 专 业 生垫堂 研 究 方 向 垫壁查基签蓥堑筮丝盈笠旦 机靠IJ研究 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一四年五月 11 摘 要 ViticisTotal 目的：研究蔓荆子总黄酮(Fructus cancerstem cells， 小细胞肺癌NCI．H446细胞系肺癌干细胞(1ung LCSCs、)自我更新、增殖和侵袭等特性的影响，并探讨其潜在作用机 制，为研发能根治小细胞肺癌药物提供实验依据。 方法：体外培养人小细胞肺癌NCI．H446细胞系细胞。采用CDl33 免疫磁珠分选法和干细胞条件培养基悬浮培养法分选和扩增CDl33+ 球形成细胞。藻红蛋白(PE)荧光标记CDl33抗体流式细胞术分析 CDl 33阳性细胞百分率。光学显微镜观察细胞形态。四甲基偶氮噻唑 细胞侵袭试验、裸鼠皮下成瘤实验和westernblot分析肿瘤干细胞标 细胞系CDl33+球形成细胞是否具有LCSCs特性以及不同浓度 FVTF(0．5、1．O、2．0 白表达和抑制LCSCs特性作用，探讨FVⅡ通过降低细胞Akt蛋白 制。 结果： CDl33。细胞群： 细胞纯度高(CDl33+细胞群：91．85士2．17％w 细胞培养板上的干细胞条件培养基中呈非粘附性三维球体生长，称之 为肺癌球；CDl33。细胞则不能形成肺癌球。CDl33+细胞的肺癌球形 成数(239+26／1000细胞)高于亲本细胞(64+11／1000细胞)的肺癌球形 成数(尸0．05)。与亲本细胞相比，CDl33+球形成细胞干细胞标志物 侵袭相关转录因子(Twistl和Snail)高表达；具有二次传代成球生长和 单个细胞形成新肺癌球体能力；具有更高侵袭能力(CDl33+球形成细 胞：3 (4／6)，然而，在相应的同一模型下至少lxl05个亲本细胞才能稳定导 致肿瘤形成(3／6)，此外，成瘤的时间长短亦有很大的差另Ij(CDl33+球 形成细胞：18天w亲本细胞：3 1天)。 VS亲本细胞：33．7 1Ifl!(IC50值，CDl33+球形成细胞：0．7gg／mL gg／mL， TT 癌球形成数俨O．